1991 Fiscal Year Annual Research Report

DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能の解析

Research Project

Project/Area Number	03267205
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	品川日出夫大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (40029799)
Keywords	ruvA遺伝子 / ruvB遺伝子 / ruvC遺伝子 / Holliday構造 / 相同的DNA組換え / DNA修復 / polB遺伝子 / DNAポリメラ-ゼII
Research Abstract	大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子は相同的組換えとDNA損傷の修復に関与していることが知られている。本年度はruvC遺伝子の構造解析と、制御様式を研究した。更にRuvA,RuvB,RuvCタンパクを精製し、相同的DNA組換えの中間体であるHolliday構造の種々のアナログを基質として、反応させ、組換え反応における機能を研究した。 1.ruvC遺伝子は19KDaのタンパクをコ-ドし、SOS調節を受けない2つのプロモ-タ-によって転写されることを証明した。(論文3) 2.RuvCタンパクを多量に生産させる系を構築し、このタンパクを多量に、しかも高度に精製することができた。(論文4,) 3.RuvCは組換え中間体であるHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレア-ゼであることを証明した。(論文4) 4.RuvAはDNA結合タンパクで,RuvBはATPase活性をもち、DNAと結合したRuvAはRuvBのもつATPase活性を著しく促進することを証明した。(論文1,2) 5.RuvAーRuvB複合体はプラスミド上のInvertedーRepeat領域に形成させた十字型構造を解消させる機能をもつことを発見した。この反応はATPの加水分解を必要とした。この活性は組換え過程での相同な二重鎖DNAの間での単鎖の交換(strandーexchange)反応と同等であると考えられる。(論文1,2) 以上の実験結果よりRuvAーRuvBはRecAによって形成されたHolliday構造に特異的に作用して、strandーexchange反応を促進し、RuvCはHolliday構造を分離して組換え反応を完成される機能をもつと考えられる。更に私達は大腸菌のDNAポリメラ-ゼIIの役割を研究したが、この酵素は生体内で、接合による組換え反応には必要ないことを明らかにした。(論文5)

Research Products
(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Shinagawa,H.: "Properties of the Escherichia coli RuvA and Ruvb proteins involved in DNA repair,recombination and mutation." Biochemie. 73. 505-507 (1991)
[Publications] Shiba,T.: "SOSーinduced DNA repair proteins,RuvA and RuvB,of Escherichia coli;Functional interaction between RuvA and RuvB for ATP hydrolysis and renaturation of the cruciform structure in supercoiled DNA." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 88. 8445-8449 (1991)
[Publications] Takahagi,M.: "Molecular analysis of the Escherichia coli ruvC gene,which encodes a Holliday junctionーspecific endonuclease." J.Bacteriol.173. 5747-5753 (1991)
[Publications] Iwasaki,H.: "Escherichia coli RuvC protein is an endonuclease that resolves the Holliday structure." EMBO J.10. 4381-4389 (1991)
[Publications] Shinagawa,H.: "SOSーinducible DNA polymerase II of E.coli is homologous to replicative DNA polymerase of eudaryotes." Biochemie. 73. 433-435 (1991)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能の解析

Principal Investigator

品川 日出夫 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (40029799)

Research Products

[Publications] Shinagawa,H.: "Properties of the Escherichia coli RuvA and Ruvb proteins involved in DNA repair,recombination and mutation." Biochemie. 73. 505-507 (1991)

[Publications] Shiba,T.: "SOSーinduced DNA repair proteins,RuvA and RuvB,of Escherichia coli;Functional interaction between RuvA and RuvB for ATP hydrolysis and renaturation of the cruciform structure in supercoiled DNA." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 88. 8445-8449 (1991)

[Publications] Takahagi,M.: "Molecular analysis of the Escherichia coli ruvC gene,which encodes a Holliday junctionーspecific endonuclease." J.Bacteriol.173. 5747-5753 (1991)

[Publications] Iwasaki,H.: "Escherichia coli RuvC protein is an endonuclease that resolves the Holliday structure." EMBO J.10. 4381-4389 (1991)

[Publications] Shinagawa,H.: "SOSーinducible DNA polymerase II of E.coli is homologous to replicative DNA polymerase of eudaryotes." Biochemie. 73. 433-435 (1991)

品川日出夫大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (40029799)