免疫グロブリン遺伝子の再構成に関与するrecombinaseの単離

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03267206
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 杉山 治夫 大阪大学, 医学部・第3内科, 助手 (70162906)
• Keywords: Ig遺伝子 / 遺伝子再構成 / DNA結合タンパク / サブトラクション

Research Abstract

(1)in vitroで培養中,Ig遺伝子の再構成を起こす未熟Bリンパ球細胞株から,核タンパクを抽出し,Ig遺伝子の7mer(CACAGTG)23bpー9mer(ACAAATACC)のrecombination signal sequenceを結合させたDNA affinityカラムを用いて,DNA binding proteinを精製→A.A.配列の決定→oligonucleotideの合成と,それを用いたcDNAクロ-ンの単離を行なった。このcDNAクロ-ンは,270コのアミノ酸をコ-ドし,in vitroでのSV40 semiーconservativeなreplicationに必要なhuman replication protein A(RPーA)と,同一のアミノ酸数及び,アミノ酸レベルでの87%のhomologyをもっていた。現在,詳細な機能を解析中であるが,preliminaryなdataでは,DNA polymerase αの活性を上げるように思われる。RPーAが,excision repairにも関与していると考えられているので,recombinationへの何らかの関与があってもおかしくないと思われる。今後,この点を見きわめる実験をしたい。(2)温度感受性変異Abelsonマウス白血病ウイルスでトランスフォ-ムしているため,非許容温度である39℃で培養すると,一斉にIg遺伝子の再構成が誘発される未熟Bリンパ球細胞を,39℃で1週間培養した時点で,cDNA libraryを作製し,Abelsonウイルスでトランスフォ-ムしたfibroblast,欠いで,最終分化したプラズマ細胞からのmRNAでsubtractionを行ない,再構成に特異的に働くcDNAクロ-ンの単離を行なった。subtractionの結果,いくつかのcDNAクロ-ンが得られた。そのうち1つのcDNAクロ-ン(SPL212ー1)は,リンパ球にspecificに発現し,プラズマ細胞にまでterminal differentiationすると発現しなくなる。SPL212ー1クロ-ンの機能解析は,knocked out mouseを作製して,決めたいと考えています。

Research Products

• [Publications] Y.Minami: "Monoclonal antiーV_H141 antibodies that specifically recognize the hevy chain variable region of,and closely related to,MOPC141 myeloma protein whose V_H gene belongs to V_HQ52 family" Immunology. 72. 464-470 (1991)
• [Publications] M.Nakagawa: "cDNA cloning of the murine 30ーkDa protein homologous to the 32ーkDa subunit of human replication protein A" Nucleic Acid Research. 19. 4292 (1991)
• [Publications] Y.Oka: "Transitory expression of Thyー1 antigen in immature B cell lines" Immunological Investigations. 21. 85-92 (1992)
• [Publications] S.Tsukada: "Continuing Vγ_2 to Jγ_2 rearrangements of murine T cell receptor gamma genes in a Bーcommitted immature cell line" Molecular Immunology.
• [Publications] S.Tsukada: "Nucleotide deletion of T cell receptor Vγ_2 and Jγ_2 coding sequences at Vγ_2ーJγ_2 junctions in immature B cell line" Molecular Immunology.
• [Publications] Y.Shimizu: "Regulation of Thyー1 gene expression by the methylation of the 5' region of Thyー1 gene and intracellular regulatory factors in immature B cells." Immunological Investigations.