1991 Fiscal Year Annual Research Report
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03404008
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
山下 興亜 名古屋大学, 農学部, 教授 (50023411)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
池田 素子 名古屋大学, 農学部, 日本学術振興会特別研
佐藤 行洋 名古屋大学, アイソトープ総合センタ, 助手 (60222022)
柳沼 利信 名古屋大学, 農学部, 助手 (60135332)
小林 迪弘 名古屋大学, 農学部, 助教授 (60111837)
今井 邦雄 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (80109313)
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| Keywords | カイコ / 休眠ホルモン / 神経ペプチド / ペプチド合成 / トレハラ-ゼ / 卵巣 / 休眠 |
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| Research Abstract |
カイコ蛹約10万頭から休眠ホルモンの分泌器官である食道下神経節を解剖摘出した。集めた神経節をエタノ-ル,メタノ-ルジクロロメタンなど有機溶媒で洗った後に水抽出することによってホルモン活性画分を得た。この画分を逆相高液体カラムクロマトグラフィ-によって分離し,活性物質を得た。さらにクロマトグラフィ-分離によって単一のホルモン物質を得た。精製度は約60万倍であり,約1ngの純品を得た。
純品をガス相アモノ酸シ-ケンサ-を用いて分析した結果,休眠ホルモンは24回のアモノ酸残基からなる分子量約2,600のペプチドであることが判明した。アミノ酸配列を確めるために,純品をエンドペプチダ-ゼ分解し,得られた分解産物のアミノ酸配列も調査した。N末端はThrであり修飾れてはいなかった。
得られた配列をもとにして,アミノ酸24個からなる2種類のペプチドを合成した。ナつはC末端がカルボン酸フリ-のものである。このペプチドは全く生物活性を示さなかった。もう1つはC末端がアミド化されたペプチドである。5ngの注射によって約20%の休眠卵を誘導した。この活性は天然のホルモン活性に匹敵するものであった。したがって休眠ホルモンは24個のアミノ酸からなるペプチドで,そのC末端がアミド化されたものであると結論された。
合成休眠ホルモンは発育中の卵巣に作用して,そのトレハラ-ゼ活性を上昇させた。このホルモン作用はアクチノマイシンーDやシクロヘキシイミドによって阻害されることから,タンバク質のde novo合成を併っていると結論された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Imai,K.,Konno,T.,Nakazawa,Y.,Komiya,T.,Isobe,M.,Koga,K.,Goto,T.,Yaginuma,T.,Sakakibara,K.and Yamashita: "Isolation and structure of diapause hormone of the silkworm,Bombyx mori." Proceedings of Japan Academy. 67B. 98-101 (1991)
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[Publications] Sato,Y.and Yamashita,O.: "Structure and expression of a gene coding for eggーspecific protein in the silkworm,Bombyx moti." Insect Biochemistry. 21. 495-505 (1991)
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[Publications] Fujiwara,Y.and Yamashita,O.: "A larval serum protein of the silkworm,Bombyx mori: cDNA sequence and developmental specificity of the transcript." Insect Biochemistry. 21. 735-742 (1991)
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[Publications] Kajiura,Z.and Yamashita,O.: "Induction of metamorphosis of the methopreneーinduced dauer larvae of the silkworm,Bombyx mori,by ecdysteroids." Comparative Biochemistry and Physiology. 101A. 277-280 (1992)
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[Publications] 山下 興亜(日本化学会編): "新ファ-ブル昆虫記" 大日本図書, 222 (1991)
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[Publications] Yamashita,O.and Suzuki,K.: "Roles of morphogenetic hormones in embryogenesis.(In the Morphogenetic hormones in Arthropods.ed.A.P.Gupta)" Rutgers University Press, 635 (1991)
