1991 Fiscal Year Annual Research Report
リバ-スジェネティックスによる遺伝性神経疾患の原因遺伝子の解明
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03404029
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
宮武 正 東京医科歯科大学, 神経内科, 教授 (50048998)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻 省次 新潟大学, 脳研究所・神経内科, 教授 (70150612)
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| Keywords | 遺伝性神経疾患 / 遺伝学 / クロ-ニング / ゲノム / リバ-スジェネティックス / ポジショナルクロ-ニング / X染色体 / Xg28 |
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| Research Abstract |
ヒトX染色体Xg28に遺伝子座の存在が知られている神経疾患(Adrenoleukoーdystrophy,EmeryーDreifuss muscular dystrophy,Xーlinked hydrocephalusなど)の原因遺伝子をリバ-スジェネティックスの手法を用いて同定することを目的として,まずヒトXg24ーgterのみをヒト染色体として含む雑積細胞(X3000ー11,1)からコスミドゲノムライブラリ-を作製しヒトに特異的な反復配列をプロ-ブとして1784個のコスミドクロ-ンを単離した。さにこれらのコスミドクロ-ンの中で物理地図の作製に有用なNotI認識部位を含むクロ-ンとして400個同定し,これらについて互いのハイブリダイゼ-ションのリ-グ戦を行いXg28領域において19個の独立したcontigを作製できた。また,コスミドクロ-ンの中でヒトーrodent間で保存された配列を有するものを同定し,このコスミドクロ-ンをプロ-ブとしてNorthernブロットでメッセンジャ-RNAの存在を確認しさらに,cDNAを1種類単離することができた。X3000ー11.1からヒト遺伝子由来のスプライシング前のRNA(heterogenous nucl ear RNA)の多くがイントロン内にヒトに特異的な反復配列を有していることを利用してヒトに特異的なheterogeneous nucledr RNAーcomplementary DNA(hncDNA)のクロ-ニング技術の開発を行い,特にreterse transcriptase の反応温度条件を詳細に検討することにより,ヒト反復配列に対するプライマ-の特異性を高めることに成功した。現在までにヒトXg28由来のhncDNAクロ-ンを6個単離している。この手法はすべての組識で発現しているhouseーKeeping geneにのみ有効と考えられたが,実際に単離されたhncDNAクロ-ンについてNorthern解析を行ってみると,中には脳のみで発現しているような組識特異的遺伝子も含まれていることが判明しhncDNAクロ-ニングが大変有用な方法であることが判明した。
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[Publications] Kondo,R.: "Identification of a mutation in the arylsulfatase A gene of a patient with adultーtype metachromatic leukodystrophy." Amer.J.Hum.Genet.48. 971-978 (1991)
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[Publications] Tanaka,H.: "Linkage analysis of juvenile Parkinsonism to tyrosine hydroxylase gene locus on chromosome 11." Neurology. 41. 719-722 (1991)
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[Publications] Naruse,S.: "Misーsense mutation ValーIle in exon 17 of amyloid precursor protein gene in Japanese familial Alzheimer's disease." Lancet. 337. 978-979 (1991)
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[Publications] Kobayashi,H.: "Construction of spinal cord cDNA library and application for subtractive cloning of spinal cord specific cDNAs." J.Mol.Neurosci. 3. 59-64 (1991)
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[Publications] Tanno,Y.: "Quantitation of mitochondrial DNA carrying tRNA Lys mutation in MERRF patients." Biochem.Biophys.Res。Commun.179. 880-885 (1991)
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[Publications] Kaneko,K.: "A new RFLP locus D8S163 maps to human chromosome 8pterー8p22。" Nucl.Acids Res.19. 6059 (1991)
