1992 Fiscal Year Annual Research Report
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03454019
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
大日方 昂 千葉大学, 理学部, 教授 (40012413)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
阿部 洋志 千葉大学, 理学部, 助手 (00222662)
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| Keywords | 筋形成 / 細胞骨格 / アクチン / アクチン結合蛋白質 / コフィリン / プロフィリン / cDNAクローニング / 筋原繊維 |
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| Research Abstract |
1)幼若骨格筋で働きアクチン集合の調節因子の構造の解析
ほ乳類の筋の発生過程で発現が上昇するコフィリンアイソフォームを見いだし、この筋型コフィリンのcDNAをPCR法によってクローン化、配列を決定した。ノーザンブロット解析により、筋型コフィリンは骨格筋、心筋、精巣、C2筋管細胞などでの顕著な発現に見いだした。また、ニワトリ幼若骨格筋で発現されるプロフィリンcDNAをクローニング、ほぼ全長の配列を決定した。
2)培養筋細胞内でのコフィリンのアクチン細胞骨格への作用の検討
クローン化されたコフィリンcDNAを用いて大腸菌内でコフィリンを合成、これを蛍光標識して若い筋細胞に多量に注入したとき、細胞内にあったアクチン繊維は速やかに崩壊してアクチンとコフィリンからなるロッド構造を形成した。しかし、24時間を経るとコフィリンの作用は消え、アクチン繊維は再生された。コフィリンcDNAのトランスフェクションにより筋細胞内のコフィリンの発現量を高めたとき、そのまではアクチンへの強い作用は見られず、細胞の熱刺激やDNSO刺激によりコフィリンは活性化され、アクチン繊維の消失とアクチン/コフィリンロッドの形成が起った。これらより、コフィリンは細胞内でその活性は制御を受けていると考えられた。また、細胞周期に依存してコフィリンのリン酸化が著しく変化、リン酸化がコフィリンの活性制御の一因であることを見いだした。
3)萎縮筋におけるアクチン結合蛋白質の発現変化
筋萎縮が起こる除神経筋やジストロフィー症の筋でコフィリンの発現量の増加を明らかにし、萎縮中の筋でのアクチン細胞骨格の変動にコフィリンの関与を示唆した。
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[Publications] Takashi Obinata: "Regulation of actin assembly in embryonic chicken skeletal muscle by three different actin-binding proteins." Frontiers in Muscle Research(Elsevier Science Publishers). 235-247 (1991)
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[Publications] Yuko Tokuue: "Transfection of chicken skeletal muscleα-actinin cDNA into nonmuscle and myogenic cells:dimerizatio is not essential for α-actinin to bind to microfilament." Experimental Cell Research. 197. 158-167 (1991)
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[Publications] Shoichiro Ono: "Colocalization of ADF and cofilin in intranuclear actin rods of cultured muscle cells." J.Muscle Res.Cell Motility. (1993)
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[Publications] Hiroki Nakae: "Ascidian entactin/nidogen:implication of evolution by shuffling two kinds of cysteinerepeats." European J.Biochemistry. (1993)
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[Publications] Hiroshi Abe: "Cellular distrubution and intranuclear localization of cofilin in cultured myotubes." Experimental Cell Research. (1993)
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[Publications] Takashi Obinata: "Contractile proteins and myofibrillogenesis." International Review Cytology. 143. 153-189 (1993)
