サル類CD4およびCD8分子;遺伝子クロ-ニングとSIV感染における役割

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03454109
• Research Institution: 国立予防衛生研究所
• Principal Investigator: 巽 正志 国立予防衛生研究所, 獣疫部, 主任研究官 (00133629)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森川 茂 国立予防衛生研究所, 腸内ウイルス部, 研究員 (00167686) ; 網 康至 国立予防衛生研究所, 獣疫部, 研究員 (10202699) ; 山田 靖子 国立予防衛生研究所, 獣疫部, 主任研究官 (20158223) ; 松浦 善治 国立予防衛生研究所, 獣疫部, 主任研究官 (50157252)
• Keywords: CD4遺伝子、 / CDRー1領域、 / PCR, / アミノ酸置換 / cDNA / 塩基配列決定

Research Abstract

カニクイザル胸腺細胞より、グアニジンCsCl法にてcDNAを合成してRNA分画を精製し、さらにOligo(dT)セルロ-スカラムにてpolyA(+)mRNAを精製した。このmRNAよりGublerーHoffmann法にてcDNAを合成しλZAPベクタ-へ組み込み、サルリンパ球ライブラリを構築した。すでに塩基配列が判明しているヒトCD4遺伝子より、CD4分子コ-ド全額域を含む特定部位を選択し、合成プライマ-を作製し、PCR法にてカニクイザルCD4遺伝子を増幅したところ、期持された約1.5kbpの核酸断片が得られた。この増幅断片をプロ-ブにしてプラ-クハイブリダイゼ-ション法にてCD4遺伝子が組み込まれているファジ-を選別したところ、3クロ-ンが得られた。その塩基配列を検討したところ、いずれのクロ-ンもCD4遺伝子の全領域の約半分の領域しか含まれていなかった。そこでPCR産物そのものを、EcoRV切断後末端にdTTPを付加した"T"vector pBluescriptSK(+)へ組み込み、Deletion法とDideoxy法によりカニクニザルCD4(CyCD4)遺伝子の全塩基配列を決定した。CyCD4遺伝子のコ-ド領域は1377塩基よりなり、ヒトCD4遺伝子と比較して55塩基のみが異鳴っており、95%の高い相同性を示した。アミノ酸配列レベルでは、シグナル蛋白および膜貫通部位ではそれぞれlアミノ酸の置換があるのみで、細胞内部位は全く相同であった。サルCD4分子もヒトCD4分子と同様、そのcystine殘基の位置は保存され、細胞外構成成分は4個のドメインから成り、ス-パ-免疫グロブリン遺伝子ファミリ-に属することが示された。アミノ酸配列レベルでのカニクイザルとヒトCD4分子の相違は、免疫グロブリンL鎖可変部位と相同性を有するドメイン1ではCDR(Complementary Determining Region)ー1領域内とその近傍に集積していた。これらの領域でのアミノ酸の置換は疎水性分析により、ヒトCD4分子と極性が転換する可能性が示された。一方ドメイン3では116アミノ酸殘基のうち2箇所のみ異なり高い相同性を示した。

Research Products

• [Publications] TATSUMI,M.et al: "Molecular cloning of cynomolgus monkey CD4 gene and its expression with baculovirus transfer vector system"
• [Publications] TATSUMI,M.et al: "Molecular cloning of cynomolgus monkey IL 2 gene and its expression with baculovirus transfer vector system"