1993 Fiscal Year Annual Research Report

グリア・ニューロン相互作用による神経系カリウムホメオスタシス維持機構の研究

Research Project

Project/Area Number	03454131
Research Institution	INSTITUTE FOR ENZYME RESEARCH
Principal Investigator	井上勲徳島大学, 酵素科学研究センター, 助教授 (80001973)
Keywords	カリウムホメオスタシス / シュワン細胞 / イカ巨大神経 / カリウムチャネル / カルシウムイオン
Research Abstract	シュワン細胞のイオン過程を調べるためには細胞を単離する必用がある。我々はタンパク質分解酵素を用いて細胞単離を試みた。Trypsin(5mg/ml)でイカ巨大神経を前処理して表層の結合組織を取り除き、神経・シュワン細胞標本を先ず作成し、次にCollagenase(6mg/ml)、Papain(3mg/ml)処理してシュワン細胞を単離した。単離したシュワン細胞にパッチクランプ法を適用し、ホールセルモードでイオン電流を記録した。図6の結果からカルシウムイオンが重要な役割を演じている事が示唆されているのでまずCa^<2+>電流の記録を試みた。カルシウムチャネルの電荷運搬体としてBa^<2+>を用いてBa^<2+>電流を記録した。K^+電流を抑えるためこの場合細胞内をCs^+塩溶液で置換した。図8aに記録したBa^<2+>電流の例を示す。膜電位はあらかじめ-60mVにホールドし、そこから10mVごとの脱分極パルスを与えた。-30mVから内向きBa^<2+>電流が現れ始め、+20mVで最大になった。活性化は比較的ゆっくりとし時定数は10msのオーダーであった。このBa^<2+>電流は外液に与えた1mM Co^<2+>でほぼ完全に抑制された。細胞外を正常の海水に近い組成に保ち、細胞内を正常に近いK^+塩溶液で置換すると同じ脱分極パルスにたいして外向き電流が記録される。これはK^+電流と考えられるが、外側から与えた4-aminopyridine(4AP)、・tetraethyl-ammonium(TEA^+)によっては目立った阻害を受けなかった。一方、Ca^<2+>によってこの電流はほぼ完全に阻害された。この事から、このK^+電流はCa^<2+>-activated K^+チャネルを透過した事が強く示唆された。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Inoue,I.: "ATP-sensitive K^+ channel in the mitochondrial inner membrane" Nature. 352. 244-247 (1991)
[Publications] Amar,M.: "Patch clamp analysis of the effect of the insectide deltamethrin on insect neurones" J.Exp.Biol.163. 65-84 (1992)
[Publications] Miyoshi,M.: "Endothelin blocks ATP-sensitive K^+ channel and depolarizes smooth muscle cell of porcine coronary artery" Circulation Res.70. 612-616 (1992)
[Publications] Inoue,I.: "Comparative physiology of excitation-contraction coupling" Jap.J.Physiol.43. 275-278 (1993)
[Publications] Nagahama,T.: "Acetylcholine activated chloride channels produce an inhibitory junction potential in buccal muscle cells of Aplysia" Proc.Roy.Soc.Lon.B.(in press).
[Publications] Inoue,I.: "Evolution of skeletal muscle excitation-contraction coupling and the appearance of dihydropyridine sensitive intramembrane charge movement" Proc.Roy.Soc.Lond.B. (in press).
[Publications] I.Inoue: "Resting and active K channels in the squid axon membrane in “Cephalopod Neurobiology"" Oxford University Press (in press),
[Publications] I.Inoue: "ATP-sensitive K channel in the inner membrane of rat liver mitochondria in “Handbook of Membrane channels"" Academic Press (in press),

1993 Fiscal Year Annual Research Report

グリア・ニューロン相互作用による神経系カリウムホメオスタシス維持機構の研究

Principal Investigator

井上 勲 徳島大学, 酵素科学研究センター, 助教授 (80001973)

Research Products

[Publications] Inoue,I.: "ATP-sensitive K^+ channel in the mitochondrial inner membrane" Nature. 352. 244-247 (1991)

[Publications] Amar,M.: "Patch clamp analysis of the effect of the insectide deltamethrin on insect neurones" J.Exp.Biol.163. 65-84 (1992)

[Publications] Miyoshi,M.: "Endothelin blocks ATP-sensitive K^+ channel and depolarizes smooth muscle cell of porcine coronary artery" Circulation Res.70. 612-616 (1992)

[Publications] Inoue,I.: "Comparative physiology of excitation-contraction coupling" Jap.J.Physiol.43. 275-278 (1993)

[Publications] Nagahama,T.: "Acetylcholine activated chloride channels produce an inhibitory junction potential in buccal muscle cells of Aplysia" Proc.Roy.Soc.Lon.B.(in press).

[Publications] Inoue,I.: "Evolution of skeletal muscle excitation-contraction coupling and the appearance of dihydropyridine sensitive intramembrane charge movement" Proc.Roy.Soc.Lond.B. (in press).

[Publications] I.Inoue: "Resting and active K channels in the squid axon membrane in “Cephalopod Neurobiology"" Oxford University Press (in press),

[Publications] I.Inoue: "ATP-sensitive K channel in the inner membrane of rat liver mitochondria in “Handbook of Membrane channels"" Academic Press (in press),

井上勲徳島大学, 酵素科学研究センター, 助教授 (80001973)