1991 Fiscal Year Annual Research Report
ハイブリッドサブトラクト/バイオアッセイによるド-パミン細胞成長促進因子の同定
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03454133
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
西野 仁雄 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (60073730)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
端谷 毅 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (30172852)
古山 富士弥 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (00080101)
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| Keywords | ド-パミンニュ-ロン / 栄素因子 / ハイブリダイゼ-ション / バイオアッセイ / mRNA / cDNA / 線条体 / パ-キンソン病 |
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| Research Abstract |
ラットを用いた脳神経移植研究において、ド-パミン(DA)ニュ-ロンは正常線条体よりもDA入力を欠如した線条体に移植する方がよりよく成長する。これはDA入力を欠如した線条体にはDAニュ-ロンの成長を促進する栄養因子が増量していることを示唆する。
そこで、正常及びDA入力を欠如した線条体組織よりmRNAを調整し、λGEM4をベクタ-として用いcDNAライブラリ-を作製した。えられた約4万個のライブラリ-中54個のクロ-ンがDA入力を欠如した線条体組織中で増加していることがわかった(ディファレンシァルハイブリダイゼ-ション)。これらを制限酵素で切り、サザ-ンブロットで解析すると、500〜1KbaseのDNAが対照に比べ約10倍量に増加していることが明らかになった。現在これらのシ-クエンスを解析中である。
一方、脳をスライスし、これより黒質を含む脳幹腹側部の切り出し細胞を調整し培養にかけると、DAニュ-ロンの収率が従来の培養法に比べ非常に高くなった。この新しいDAニュ-ロンの培養法を用いて、線条体組織抽出液中のDAニュ-ロン栄養活性をバイオアッセイする方法を解立した。
DA入力を欠如した細条体組織ホモジネ-トの上清を二次元電気泳動で分析すると15(6),20,30,50,65kDaのタンパクが増量している。これらのうちの一つはチユブリンのβ鎖であることがわかったが、他は微量のため、まだシ-クエンシングに成功していない。今年度はこれらを同定するとともに生理活性との対応を明らかにしたい。
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[Publications] H.Nishino,T.Hashitani & M.Kumazaki: "Grafting of Catecholaminergic cells in the mammalian brain and reconstruction of disturbed function:basic problems to be solved." Comp.Biochem.Physiol.98C. 211-220 (1991)
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[Publications] H.Nishino,S.Hattori,K.Muramoto & T.Ono: "Basal ganglia neural activity during operant feeding behavior in the monkey relation to sensory integration and motor execution." Brain Res.Bull.27. 463-468 (1991)
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[Publications] Y.Ishida,H.Hashiguchi,R.Yamamoto,H Nishino et al.: "Effect of intraーamygdala dopaminergic grafts on methamphetamineーinduced locomotor activity,extracellular dopamine and dopamine metabolite ovorflow : a comparison with the effect of intraーaccumbons grafts." Brain Res.549. 342-345 (1991)
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[Publications] Y.Oomura,H.Nishino,Z.Karadi,S.Aou & T.R.Scott: "Taste and olfactory modulation of feeding related neurons in behaving monkey." Physiol.Behav.49. 943-950 (1991)
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[Publications] Z.Kardi,Y.Oomura,H.Nishino,T.R.Scott et al.: "Responses of lateral hypothalamic glucoseーsensitive and glucoseーinsensitive neurons to chemical stimuli in behaving rhesus monkeys." J.Neurophysiol.
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[Publications] H.Nishino,T.Hashitani & M.Kumazaki: "Effects of trophic factors on functional recovery after grafting of dopaminergic neurons in 6ーOHDA lesioned rats." Adv.Neurotrauma Res.
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[Publications] S.Hattori,Q.M.Li,N.Matsui & H.Nishino: "Treadmill running test for evaluating locomotor activity after 6ーOHDA lesions and dopaminergic cell grafts in the rat." Brain Res.Bull.
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[Publications] T.Hashitani,F.Furuyama,H.Nishino et al.: "αーsialyl cholesterol and sialidaseーtolerant derivative,αー(3βーhydroxysialyl)cholesterol,stimulate the development of midbrain dopaminergic neurons and motor recovery following intracerebral grafting in 6ーOHDA treated rats." Brain Res.Bull.
