1991 Fiscal Year Annual Research Report
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03454149
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
山下 哲 群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉本 博之 群馬大学, 医学部, 助手
保坂 公平 群馬大学, 医学部, 講師 (70108992)
内田 勉 群馬大学, 医学部, 助手 (00160276)
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| Keywords | ホスファチジルコリン代謝 / コリンキナ-ゼ / ホスホリパ-ゼC / 遺伝子発現 / プロモ-タ- / イノシト-ル・コリン調節 |
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| Research Abstract |
動物のホスファチジルコリン代謝の調節酵素コリンキナ-ゼとホスファチジルコリンホスホリパ-ゼC(PCーPLC)について精製とcDNAクロ-ニング、酵母については遺伝子発現機構を研究した。
1.コリンキナ-ゼcDNAのクロ-ニングと発現調節:ラット肝臓からcDNAをクロ-ニングした。酵素は435アミノ酸残基からなり、分子量は49,737であった。この酵素(R型)は我々が前に精製した脳の酵素(P型)とは免疫学的に区別された。ラットに3ーメチルコラントレン、四塩化炭素を投与するとR型アイソザイムが誘導された。ヒトのグリオブラスト-マcDNAライブラリ-から酵母コリンキナ-ゼ変異の相補によりR型cDNAを得た。ヒトコリンキナ-ゼは456アミノ酸残基からなり、分子量は52,065であった。
2.ホスファチジルコリンホスホリパ-ゼCの精製と性質:PCーPLCをラット肝臓100,000xg上清から約1,100倍精製し均一な標品を得た。収率は14%、分子量はSDS電気泳動で24Kであった。酵素はDAGによる産物阻害を受け、DAGリパ-ゼ、あるいはクモノスカビのリパ-ゼを添加してDAGを除去すると酵素は強く活性化された。酵素の基質特異性を調べたところ、PC、PEはいずれも良い基質となったが、PIはまったく分解されず、酵素はPC、PEに特異的であることが明らかになった。
3.酵母ホスファチジルコリン合成酵素の遺伝子発現調節:イノシト-ル、コリンによって一律に抑制されるPEメチル化経路の遺伝子PEM1、PEM2、およびPS合成酵素遺伝子PSSのプロモ-タ-域の解析を行ない、イノシト-ル・コリン調節に関係する塩基配列CATRTGAAを同定した。配列内で塩基置換すると調節は失なわれ、この配列を他の遺伝子の前におくと遺伝子はイノシト-ル・コリン調節を受けるようになった。
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[Publications] Tsukagoshi,Y.: "Expression of the CCT gene encoding cholinephosphate cytidylyltransferase of Saccharomyces cerevisiae in Escherichia coli" J.Bacteriol.173. 2134-2136 (1991)
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[Publications] Nikawa,J.: "Isolation and characterization of two distinct myoーinositol transport genes of Saccharomyces cerevisiae" J.Biol.Chem.266. 11184-11191 (1991)
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[Publications] Kodaki,T.: "Functional analysis of the regulatory region of the yeast phosphatidylserine synthase gene,PSS" J.Bacteriol.173. 7992-7995 (1991)
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[Publications] Uchida,T.: "Molecular cloning,characterization,and expression in Escherichi coli of a cDNA encoding mammalian choline kinase" J.Biol.Chem.267. (1992)
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[Publications] Johnson,J.: "Comparison of the lipid regulation of yeast and rat CTP: phosphocholine cytidylyltransferase expressed in COS cells" Biochem.J.(1992)
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[Publications] Nikawa,J.: "IRE1 encodes a putative protein kinase containing a membraneーspanning domain and is required for inositol prototrophy in Saccharomyces cerevisiae" Mol.Microbiol.(1992)
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[Publications] Dennis,E.: "Methods in Enzymology(209巻)" Academic Press, (1992)
