マレック病発症及びその防御に関与するウィルス遺伝子解析

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03454187
• Research Institution: TOKYO MEDICAL AND DENTAL UNIVERSITY
• Principal Investigator: 平井 莞二 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (00100991)
• Keywords: マレック病ウイルス(MDV) / 腫瘍 / 塩基配列決定 / プロテインキナーゼ / 組換え体MDV / ワクチン / 制限酵素切断地図 / 遺伝子産物

Research Abstract

1.マレック病(MD)発症関連領域の塩基配列解析:MD発症関連ゲノム領域である。9.3kbの塩基配列決定により14個のORFを見いだした。転写活性が認められるORFの内、大腸菌プラスミド数を調節する遺伝子やKチャンネルに関与する遺伝子とホモロジーが認められたことは興味深い。現在そのコード蛋白を同定中である。
2.MDV1-US3遺伝子産物の同定:MDV1-GA株の70%のUs領域と一部のIRs領域を含む8.9kbのDNA断片の塩基配列を決定した。9つのORFを見いだし、その内4個は単純ヘルペスウイルスのUS10、US3、US2、US6(糖蛋白gD)遺伝子とホモロジーをもつことを明らかにした。このUS3遺伝子がプロテインキナーゼをコードすることを昆虫ウイルスベクターを用いて明らかにした。
3.組換え体MDVIワクチンの構築:大腸菌lacz遺伝子を22カ所のMDV1 DNA に相同組換えにより挿入させたが、4カ所が安定な挿入部位であることを見いだし、そのうち1の項で示したUS10とUS3の両遺伝子領域に挿入した組換え体MDV1は培養細胞で母株同様の増殖がみられ、in vivo でMDV1に対する防御能力を示した。
4.MDV2 DNAの制限酵素切断地図作成:MDV2 DNAのBamHI,EcoRI,XhoI切断地図を作成した。また、3つの血清型のゲノムはcollinearであることを示した。

Research Products

• [Publications] Akira Iwata: "Sequence determination of cDNA clones of transcripts from the tumor-associated region of the Marek's disease virus genome." VIROLOGY. 187. 805-808 (1992)
• [Publications] Mitsuru Ono: "The restriction endonuclease map of Marek's disease virus(MDV) serotype2 and collinear relationship amog three serotypes of MDV." VIROLOGY. 191. 459-463 (1992)
• [Publications] Masashi Sakaguchi: "Sequence determination and genetic content of an 8.9-Kb restriction fragment in the short unique region and the internalinverted repeat of Marek's disease virus type 1 DNA." VIRUS GENES. 6:4. 365-378 (1992)
• [Publications] Kazuhiro Nakajima: "Comparison of indirect immunofluorecence(IF)test with enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) in screening of hybridomas to very virulent Marek's disease virus." Microbiol.Immunol.36(2). 191-197 (1992)
• [Publications] Geng-Sheng zhu: "Differentiation of oncogenic and nononcogenic strains of Marek's disease virus type 1 by using polymerase chain reaction DNA amplification." AVIAN DISEASE. 36. 637-645 (1992)
• [Publications] Masashi Sakaguchi: "Marek's disease virus protein kinase gene idenitified within the short unique region of the viral genome is not essential for in vitro viral replication and vaccine-induced immunity in chickens." VIROLOGY.