1993 Fiscal Year Annual Research Report

相同的組換えによる遺伝子破壊に基づくDNAポイソメラーゼの機能解析

Research Project

Project/Area Number	03454496
Research Institution	Aichi Cancer Center Research Institute
Principal Investigator	安藤俊夫愛知県がんセンター, 生化学部, 部長 (20012693)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中村普武愛知県がんセンター, 分子生物研究室, 室長 (30109938) 清水暁愛知県がんセンター, 病態研究室, 室長 (10073123) 小祝修愛知県がんセンター, 生化学部, 主任研究員 (50132923)
Keywords	DNAポリメラーゼ / 相同的組換え / 遺伝子破壊
Research Abstract	哺乳類動物におけるDNAトポイソメラーゼ(トポ)Iの細胞内機能を明らかにする目的で、最終的にはマウストポIの遺伝子破壊を個体レベルで行おうとするものである。本年度は次の実験を行い結果を得た。(1)トポI特異的な抗体を細胞核に注入すると細胞内RNAも、同時に外から導入されたSV40ウイルスのT-抗原遺伝子からのmRNAの転写も阻害された。トポIの転写における重要性を示すものである。(2)マウストポIのN末端130アミノ酸に相当する約400塩基対のcDNAを用いて動物細胞において誘導可能なマウス乳癌ウイルスのLTRをプロモーターに持つベクターにセンスとアンチセンスに連結した構築を作製した。また同様にマウストポIIalphaのN端に相当する約400塩基対のcDNAをセンスとアンチセンスにメタロチオネインプロモーターに連結したプラスミドを構築した。これ等を同時にマウスNIH3T3にトランスホームし、トポI、トポIIのアンチセンを発現された時のDNA代謝の乱れ、及び細胞の生死判別によりそれぞれの機能的関連を検討する予定である。(3)マウスcDNAをプローブとして、エクソン4-8を含むゲノムDNAを単離し、更にエクソン7と8を含むクローンのエクソン7のEcoVサイトにNeo遺伝子を、エクソン8の下流のイントロンにTK遺伝子を挿入した遺伝子破壊用のベクターND5-3と、エクソン7の上流にTKを挿入したND5-8を構築した。これ等をマウス胚性腫瘍EC細胞に導入し選択培養を行い10〜15クローンの形質転換株を分離した。PCR法により調べた結果、現在までの所、相同的組換えを起こした株は得られなかった。

Research Products

(9 results)

All Other

All Publications (9 results)

[Publications] Tamura,H.,Kohchi,C.,Yamada,R.,Koiwai,O.,Andoh,T.et.al.: "Molecular cloning of a cDNA of a camptothecin-resistant human DNA topoisomerase I and identification of mutation sites." Nucl.Acids Res.19. 69-75 (1991)
[Publications] Ishimi,Y.,Nishizawa,M.and Andoh,T.: "Characterization of a camptothecin-resistant human DNA topoisomerase I in an invitro system for Simian Virus 40 DNA replication." Eur.J.Biochem.202. 835-839 (1991)
[Publications] Tanabe,K.,Ikegami,Y.,Ishida,R.and Andoh,T.: "Inhibition of topoisomerase II by antitumor agents bis(2,6-dioxopiperazine)derivatives." Cancer Res.51. 4903-4908 (1991)
[Publications] Ishida,R.,Maki,T.,Narita,T.,Yui,K.,Andoh,T.et.al.: "Inbition of Intracellular topoisomerase II by antitumor bis(2,6-dioxopiperazine)derivatives.Mode of cell growth inhibition distinct from that of cleabvable complex-forming type inhibitor." Cancer Res.51. 4909-4916 (1991)
[Publications] Ishimi,Y.,Ishida,R.and Andoh,T.: "Effects of ICRF-193,a novel DNA topoisomerase II inhibitor,on Simian Virus 40 DNA and chromosome replication in vitro." Molec.Cell.Biol.12. 4007-4014 (1992)
[Publications] Ono,K.Ikegami,Y.,Nishizawa,M.and Andoh,T.: "Menogaril,an anthracycline derivative,inhibits DNA topoisomerase II by stabilizing clevable complexes." Jpn.J.Cancer Res.83. 1018-1023 (1992)
[Publications] Matsumoto,K.,Sugawara,I.,Takahashi,T.and Andoh,T.: "Injection of antitopoisomerase I IgG into nuclei of mouse L929 cells leads to inhibition of transcription of exogeusly introduced SV40 large T antigen gene." Exptl.Cell Res.204. 6-10 (1993)
[Publications] Koiwai,O.,Yasui,Y.,Sakai,Y.,Watanaba,T.,Andoh,T.et.al.: "Clonig of the mouse cDNA encoding DNA topoisomerase I and chromosomal location of the gene." Gene. 125. 211-216 (1993)
[Publications] Roca,J.,Ishida,R.,Berger,J.M.,Andoh,T.and Wang,J.C.: "Antitumor bisdioxpiperazines inhbit yeast DNA topoisomerase II by trapping the enzyme in the form of a closed protein clump." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.91. 1781-1785 (1994)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

相同的組換えによる遺伝子破壊に基づくDNAポイソメラーゼの機能解析

Principal Investigator

安藤 俊夫 愛知県がんセンター, 生化学部, 部長 (20012693)

Research Products

[Publications] Tamura,H.,Kohchi,C.,Yamada,R.,Koiwai,O.,Andoh,T.et.al.: "Molecular cloning of a cDNA of a camptothecin-resistant human DNA topoisomerase I and identification of mutation sites." Nucl.Acids Res.19. 69-75 (1991)

[Publications] Ishimi,Y.,Nishizawa,M.and Andoh,T.: "Characterization of a camptothecin-resistant human DNA topoisomerase I in an invitro system for Simian Virus 40 DNA replication." Eur.J.Biochem.202. 835-839 (1991)

[Publications] Tanabe,K.,Ikegami,Y.,Ishida,R.and Andoh,T.: "Inhibition of topoisomerase II by antitumor agents bis(2,6-dioxopiperazine)derivatives." Cancer Res.51. 4903-4908 (1991)

[Publications] Ishida,R.,Maki,T.,Narita,T.,Yui,K.,Andoh,T.et.al.: "Inbition of Intracellular topoisomerase II by antitumor bis(2,6-dioxopiperazine)derivatives.Mode of cell growth inhibition distinct from that of cleabvable complex-forming type inhibitor." Cancer Res.51. 4909-4916 (1991)

[Publications] Ishimi,Y.,Ishida,R.and Andoh,T.: "Effects of ICRF-193,a novel DNA topoisomerase II inhibitor,on Simian Virus 40 DNA and chromosome replication in vitro." Molec.Cell.Biol.12. 4007-4014 (1992)

[Publications] Ono,K.Ikegami,Y.,Nishizawa,M.and Andoh,T.: "Menogaril,an anthracycline derivative,inhibits DNA topoisomerase II by stabilizing clevable complexes." Jpn.J.Cancer Res.83. 1018-1023 (1992)

[Publications] Matsumoto,K.,Sugawara,I.,Takahashi,T.and Andoh,T.: "Injection of antitopoisomerase I IgG into nuclei of mouse L929 cells leads to inhibition of transcription of exogeusly introduced SV40 large T antigen gene." Exptl.Cell Res.204. 6-10 (1993)

[Publications] Koiwai,O.,Yasui,Y.,Sakai,Y.,Watanaba,T.,Andoh,T.et.al.: "Clonig of the mouse cDNA encoding DNA topoisomerase I and chromosomal location of the gene." Gene. 125. 211-216 (1993)

[Publications] Roca,J.,Ishida,R.,Berger,J.M.,Andoh,T.and Wang,J.C.: "Antitumor bisdioxpiperazines inhbit yeast DNA topoisomerase II by trapping the enzyme in the form of a closed protein clump." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.91. 1781-1785 (1994)

安藤俊夫愛知県がんセンター, 生化学部, 部長 (20012693)