1992 Fiscal Year Annual Research Report

色素性乾皮症D群の相補遺伝子のクローニング

Research Project

Project/Area Number	03454552
Research Institution	Kobe University
Principal Investigator	藤原美定神戸大学, 医学部, 教授 (70030848)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	松本明神戸大学, 医学部, 講師 (80181759)
Keywords	色素性乾皮症 / DNA除去修復 / DNA修復欠損 / D群相補cDNA / 発現クローニング / cDNA導入による形質転換
Research Abstract	色素性乾皮症(XP)のD相補群(XPD)は、XPAやXPCとともに、世界的に頻度が高く、高発癌性を示す。XPD群細胞はXPAに次いでUVによるピリミジン2量体や(6-4)光産物のDNA損傷の修復能を80-90%欠損する。まず大切なことはXPD細胞のUV感受性とDNA除去修復能の欠損を相補するcDNA遺伝子をクローニングすることである。これはXPDタンパクの分子修機構上での役割を知るためにも大切である。本年度は、pSVOriで不死化した日本人XPD患者由来のXP59TOpSV細胞にヒト正常cDNAのpcD2ライブラリー(G418耐性の選択マーカーであるneo遺伝子を発現する)の導入とG418/UV選択によって得られた21クローンにつき、UV生存曲線と不定期DNA合成(UDS)を検定した。その中もっともUV抵抗性であったpcD2-D17クローンでも平均致死線量Do=1.2J/m^<2、>UDS=35-50%であり、いずれも親株XP59TOpSV(Do=0.7J/m^2、UDS=40%)を十分に相補する結果が得られなかった。したがって、pcD2-cDNAの中に完全長のXPDcDNAがないことが示唆さされた。そこで正常cDNAをLTRプロモター下流に一方向性に挿入し、かつneo遺伝子をもつpCEV-cDNAライブラリー(10μg/ml)を大スケール(4回、総数5x10^7)でXPD群のXP59TOpSV細胞に導入し、選択した。究極的に2個の安全な部分的UV抵抗性のクローン(pCEV-D2,pCEV-D4)が得られた。これら2クローンは、Do=1.5-2.0J/m^2を示し、親株XP59TOpSV(Do=0.7J/m^2)の2-3倍の大きいDo値を示し、正常の1/2-1/3の部分相補が得られた。これらのクローンのUDSは正常の70-80%まで回復し、親株の2-3倍の回復を示した。より多くの修復能を獲得したpCEV-D2のゲノムDNAは約9kbのMluIのplasmid制限酵素断片をもち、約2.5kbcDNAを含んでいた。これは、ERCC2cDNAと同じNotI部位とPCR増幅を示すので、XPDcDNAが発現クローニングされたことを示している。日本人の3人XPD細胞のmRNAをRT-PCRすると、少なくとも1例にmRNA量の異常が見られた。

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] Yamamoto,Y.,: "Roles of uracil-DNA glycosylase and apyrimidinic endonucleases in the molecular 5-bromo-2-Deoxyuridine photosensitization in Escherichia coli K-12." Photochemistry and Photobiology.
[Publications] Fujiwara.Y.,: "A new anticancer platinum compound,DWA2114R: DNA interstrand cross-linking,repair and lethal effects in nomal human,Fanconis anemia and xeroderma pigmentosum cells." British Journal of Cancer.
[Publications] Nakura,J.,: "Close linkage of the gene for Werner's syndrome to ANK1 and D8S87 in the short arm of chromosome 8." Gerontology.
[Publications] Nakamura,M.,: "Leber hereditary optic neuropathy in the Japanese pedigress: Genetic control by the homoplamic ND4mutation and an dbnormalX-linked recessive gene." Human Genetics.
[Publications] Nakamura,M.,: "Mitochondrial DNA analysis in Japanese pedigrees with Leber hereditary optic neuropathy." Archies of Ophthalmology.

1992 Fiscal Year Annual Research Report

色素性乾皮症D群の相補遺伝子のクローニング

Principal Investigator

藤原 美定 神戸大学, 医学部, 教授 (70030848)

Research Products

[Publications] Yamamoto,Y.,: "Roles of uracil-DNA glycosylase and apyrimidinic endonucleases in the molecular 5-bromo-2-Deoxyuridine photosensitization in Escherichia coli K-12." Photochemistry and Photobiology.

[Publications] Fujiwara.Y.,: "A new anticancer platinum compound,DWA2114R: DNA interstrand cross-linking,repair and lethal effects in nomal human,Fanconis anemia and xeroderma pigmentosum cells." British Journal of Cancer.

[Publications] Nakura,J.,: "Close linkage of the gene for Werner's syndrome to ANK1 and D8S87 in the short arm of chromosome 8." Gerontology.

[Publications] Nakamura,M.,: "Leber hereditary optic neuropathy in the Japanese pedigress: Genetic control by the homoplamic ND4mutation and an dbnormalX-linked recessive gene." Human Genetics.

[Publications] Nakamura,M.,: "Mitochondrial DNA analysis in Japanese pedigrees with Leber hereditary optic neuropathy." Archies of Ophthalmology.

藤原美定神戸大学, 医学部, 教授 (70030848)