PAF受容体遺伝子をプローブとした新規免疫調節物質の探索と開発

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03557017
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 清水 孝雄 東京大学, 医学部(医), 教授 (80127092)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 寺尾 泰次 武田薬品(株), 化学研究所, 所長 ; 本田 善一郎 東京大学, 保健センター, 助手 (70238814) ; 脊山 洋右 東京大学, 医学部(医), 教授 (90010082)
• Keywords: PAF / 遺伝子 / エンドトキシン

Research Abstract

PAF(血小板活性因子)は免疫・アレルギー反応の重要なメディエーターの一つである。ヒト白血球,モルモット肺より得たPAF受容体クローンを用いて,以下の知見を得た。
1.PAF受容体遺伝子構造の解析
ヒト白血球cDNAをプローブとして,ヒト胎盤ゲノムライブラリーをスクリーニングした結果,PAF受容体遺伝子は三つのエクソン(エクソン1,2,3)より構成され,いずれも一番染色体に存在することが明かとなった。白血球型はエキソン1とエキソン3,心臓型はエキソン2と3が,それぞれスプライスされて生成されたものであり、異ったプロモーターに支配されることが明かとなった。
2.PAFによる情報伝達のメカニズム
免疫調節物質を開発する目的で、PAF受容体を大量発現させたCHO細胞を樹立し、受容体とその下流のシグナル伝達を解析した。PAF受容体刺激は、ホスホリパーゼC,ホスホリパーゼA2及びMAPキナーゼの活性化を促し、またアデニル酸シクラーゼの阻害をおこすことが明かとなった。一つの受容体がおそらくは異なるGタンパクを介して、各種のエフェクターにシグナルを送ると考えられる。
3.PAF受容体へのLPSの刺激
クローン化したPAF受容体を発現させたCHO細胞に細菌性のエンドトキシン(LPS)を与えると細胞内カルシウムの増加が認められた。またヒト血小板でもLPSはカルシウム増加と凝集をひきおこした。この二つの細胞の反応はPAF受容体拮抗薬で阻害された。エンドトキシンショックの病態の少なくとも一部はPAF受容体の直接活性化と考えられた。以上の知見を基に種々の抗アレルギー剤及び免疫活性化剤のスクリーニングシステムを開発した。

Research Products

• [Publications] Shimizu,T.et al.: "Platelet-activating factor receptor and signal transduction." Biochem.Pharmacol.44. 1001-1008 (1992)
• [Publications] Shimizu,T.: "Molecular cloning of platelet-activating factor receptor." PAF receptor signal transduction.29-40 (1992)
• [Publications] Sugimoto,T.et al.: "Molecular cloning and characterization of the platelet-activating factor receptor gene ex-pressed in human heart." Biochem.Biophys.Res.Commun.189. 617-624 (1992)
• [Publications] Honda,Z.et al.: "Properties of the guinea-pig lung platelet-activating factor receptor encoded by the cloned cDNA" J.Lipid Mediator. 5. 105-107 (1992)
• [Publications] Minami,M.et al.: "Leukotriene A4 hydrolse,a bifunctional enzyme." FEBS Lett.309. 353-357 (1992)
• [Publications] Bito,H.et al.: "Platelet-activating factor (PAF) receptor in rat brain." Neuron. 9. 285-294 (1992)