1992 Fiscal Year Annual Research Report

腸管感染症原因菌の迅速同定のためのビーズELISAキットの開発

Research Project

Project/Area Number	03557023
Research Institution	KYOTO UNIVERSITY
Principal Investigator	竹田美文京都大学, 医学部, 教授 (30029772)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	奥裕一日水製薬株式会社, 開発研究部, 研究員上坂良彦日水製薬株式会社, 開発研究部, 副主任研究員本田徹朗日水製薬株式会社, 中央研究所, 所長倉園久生京都大学, 医学部, 助手 (90186487) 西渕光昭京都大学, 医学部, 助教授 (50189304)
Keywords	ビーズELISA / コレラ毒素 / Campylobacter jejuni
Research Abstract	腸管感染症は開発途上国ではコレラや赤痢がいまだに猛威をふっている一方で、わが国では、集団食中毒ばかりでなく散発例としても相当数の患者が存在する。なかには腸管出血性大腸菌や腸炎ビブリオ感染の場合のように死者が出る場合がある。これらの感染症の診断と治療に際して、現在隘路となっているのは、原因菌の同定に時間を要するという点である。検査材料を培養し原因菌を分離し、分離菌の生化学的性状を調べる現在の同定法では、最低でも20〜30時間、長い場合には72時間以上が必要である。本研究においては、すでにわれわれが開発している高感度ELISA法を腸管感染症の診断に応用することを試みた。まずコレラ毒素検出のための系を確立し、インドのカルカッタにある国立コレラ及び腸管感染症研究所と共同研究で、開発したビーズELISAがコレラの患者下痢便を直接材料として使用できるかどうか調べた結果、患者下痢便から高感度にコレラ毒素が検出できることを確認した。次いで、Campylobacter jejuniの固有抗原及び全菌に対するポリクロン抗体を調製し、調製した抗体がそれぞれの菌に対して特異性があることを確認した後、ビーズELISA系をそれぞれの抗原にたいして確立した。感度は10^3個/ml以上であった。さらにin vitroで培養した各種の菌の混合液について、C.jejuniに特異的な反応が得られるかどうかを調べた結果、C.jejuniに特異的に菌の生菌数に匹敵する反応を示した。今後実用化のためのキットの試作を試み、試作品を用いて現場での試用を行う予定である。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Yoshihiko Uesaka: "Detection of cholera toxin by a highly sensitive bead-enzyme linked immunosorbent assay" Microbiol.Immunol.36. 43-53 (1992)
[Publications] T.Ramamurthy: "Evaluation of the bead-enzyme linked immunosorbent assay for detection of cholera toxin directly from stool specimens" J.Clin.Microbiol.30. 1783-1786 (1992)
[Publications] Jun Tada: "Detection of the thermostable direct hemolysin gene (tdh) and the thermostable direct hemolysin gene (trh) of Vibrio parahaemolyticus by polymerase chain reaction" Mol.Cellular Probes.6. 477-487 (1992)
[Publications] Jun tada: "Non-isotopic microtitre plate-based assay for detecting products polymerase chain reaction amplification:Application to detection of the tdh gene of Vibrio parahaemolyticus" Mol.Cellular Probes.6. 489-494 (1992)
[Publications] Amit Pal: "Reassessment of the prevalence of heat-stable enterotoxin (NAG-ST) among environmental Vibrio cholerae non-01 isolates using a NAG-ST DNA probe" Appl.Environ.Microbiol.58. 2485-2489 (1992)
[Publications] Amit Pal: "Virulence traits of Aeromonas strains in relation to species and souce of isolation" Zentralblatta fur Bakteriologie. 276. 418-428 (1992)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

腸管感染症原因菌の迅速同定のためのビーズELISAキットの開発

Principal Investigator

竹田 美文 京都大学, 医学部, 教授 (30029772)

Research Products

[Publications] Yoshihiko Uesaka: "Detection of cholera toxin by a highly sensitive bead-enzyme linked immunosorbent assay" Microbiol.Immunol.36. 43-53 (1992)

[Publications] T.Ramamurthy: "Evaluation of the bead-enzyme linked immunosorbent assay for detection of cholera toxin directly from stool specimens" J.Clin.Microbiol.30. 1783-1786 (1992)

[Publications] Jun Tada: "Detection of the thermostable direct hemolysin gene (tdh) and the thermostable direct hemolysin gene (trh) of Vibrio parahaemolyticus by polymerase chain reaction" Mol.Cellular Probes.6. 477-487 (1992)

[Publications] Jun tada: "Non-isotopic microtitre plate-based assay for detecting products polymerase chain reaction amplification:Application to detection of the tdh gene of Vibrio parahaemolyticus" Mol.Cellular Probes.6. 489-494 (1992)

[Publications] Amit Pal: "Reassessment of the prevalence of heat-stable enterotoxin (NAG-ST) among environmental Vibrio cholerae non-01 isolates using a NAG-ST DNA probe" Appl.Environ.Microbiol.58. 2485-2489 (1992)

[Publications] Amit Pal: "Virulence traits of Aeromonas strains in relation to species and souce of isolation" Zentralblatta fur Bakteriologie. 276. 418-428 (1992)

竹田美文京都大学, 医学部, 教授 (30029772)