1993 Fiscal Year Annual Research Report
共焦点系による培養細胞・切片内サイクリックヌクレオチドの三次元測定方法
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03557034
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| Research Institution | THE UNIVERSITY OF THE AIR |
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Principal Investigator |
鬼頭 昭三 放送大学, 教養学部, 教授 (00010140)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三好 理絵 東京女子医科大学, 助手 (80209965)
仙波 純一 放送大学, 教養学部, 助教授 (30183429)
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| Keywords | A Kinase / regulatory subunit / catalytic subunit / holoenzyme / dopamine / D2受容体 / D1受容体 / cyclic AMP |
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| Research Abstract |
A Kinase(cyclic AMP dependent protein kinase)のregulatory subunit c DNAを大腸菌に取り込ませ、タンパク質を作成した。更にそれぞれ蛍光色素のtetramethylrhodamine isothiocyanateとfluorescein isothiocyanateでregulatory subunitとcatalytic subunitとを別々に標識し、これを細胞内に線条体ラット培養神経細胞内にmicroinjectし、holoenzymeを作成した。このholoenzymeを線条体の培養細胞に取り込ませ、蛍光顕微鏡下にdopamineを加え、490nmの励起光のもとで、510-550nm及び570-620nmの検出域でcyclic AMPを蛍光測定した。
線条体の培養神経細胞の中には、D1受容体を含むものとD2受容体を含むものがあり、D1受容体が刺激された場合には、cyclic AMP濃度が上昇するが、D2受容体を含む細胞が刺激された場合には逆の方向になる。更にD1受容体、D2受容体が同一の神経細胞に存在するため、その効果が相殺しあう点もあり、毎常cyclic AMPを測定できることは手枝の複雑さとあいまって、困難であることがわかった。今後、D1受容体を特に豊富に含むセルラインを用いて実験するよう計画している。
線条体の培養神経細胞の中にdopamineを加えた場合のCa^<2+>濃度の動きとcyclic AMPの関係についても検討を進めたが、heterogeneousの細胞について実験しているためもあり、必ずしも一定の関係は得られなかった。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Kito,S.: "A cytoprotective effect of nicotine on hippocampal neurons." Society for Neuroscience Abstracts. 19. 772.15 (1993)
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[Publications] Miyoshi,R.: "Effect of nicotine on neurotransmitter release from the rat hippocampus." Society for Neuroscience Abstracts. 19. 384.6 (1993)
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[Publications] Kito,S.: "Effect of glucocorticoid on hippocampal neurons:in vivo and in vitro studies." Neurochemical Research. 18. 801-860 (1993)
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[Publications] Semba,J.: "Antiepileptic drug pharmacokinetics and neuropharmacokinetics in individual rats by repetitive withdrawal of blood and cerebrospinal fluid:milacemide." Br.J.Pharmacol.108. 1117-1124 (1993)
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[Publications] Semba,J.: "Milacemide effcts on the temporal inter-relationship of amino acids and monoamine metabolites in rat cerebrospinal fluid." Euroean Journal of Pharmacology. 230. 321-326 (1993)
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[Publications] Kito,S.: "A cytoprotective effect of nicotine on hippocampal neurons." Society for Neuroscience Abstracts. 19. 772.15 (1993)
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[Publications] Miyoshi,R.: "Effect of nicotine on neurotransmitter release from the rat hippocampus." Society for Neuroscience Abstracts. 19. 384.6 (1993)
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[Publications] Kito,S.: "Effect of glucocorticoid on hippocampal neurons:in vivo and in vitro studies." Neurochemical Research. 18. 801-860 (1993)
