1991 Fiscal Year Annual Research Report

精巣上体管上皮細胞との共存培養による精子成熟系の確立と、成熟の分子機構の解明

Research Project

Project/Area Number	03640594
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	岡村直道筑波大学, 基礎医学系, 講師 (30134224)
Keywords	精子成熟 / 精巣上体 / 運動性 / 受精能 / 上皮細胞 / 初代単層培養
Research Abstract	哺乳動物の精子は、精巣上体を通過する過程で、初めて運動性と受精する能力を獲得する。この精巣上体における精子の成熟は、部域により機能分化が認められる精巣上体管上皮細胞が、その高い分泌、吸収活性によって作る特異的な微小環境によって制御されていると言える。本研究は、精子と精巣上体管上皮細胞との共存培養系を確立し、精子の成熟の分子機構を解明することを目的として始められた。本年度は、まず、精巣上体管上皮細胞の初代単層培養系の確立を試みた。即ち、頭部、体部及び尾部の成熟ブタ精巣上体管をmicro perfusionすることによって、精子を洗い出す。引き続きcollagenaseを流して管内を満たし、37℃で1時間保温する。組織をスライスすることにより、細胞を培養液中に分散させる。洗浄後、細胞浮遊液をプラスチックtube中で、1〜2時間培養器中に放置することにより、接着性の強い繊維芽細胞などを管壁に接着させて除く。その上清を、collagen coated dish又は、collagen処理したミリポアフィルタ-(ミリセル)上で培養した。以上の方法によって、精巣上体管上皮細胞が効率よく分離され、培養系に移されることが判明した。そこで、現在、精巣上体の部位特異的に分泌されるタンパク質、例えば、antagglutininや135kDaタンパク質をマ-カ-として、上皮細胞の同定を行うと共に、培養系に移された後も、組織で認められた精巣上体の各部位での機能分化が保持されているかを検討中である。更に、精子と共存培養することによって、精子の運動性や受精能の獲得に必要な条件を検討し、in vitroでの精子の成熟系を確立したい。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Okamura,N.,Tajima,Y.,Onoe,S.,and Sugita,Y.: "Purification of bicarbonateーsensitive sperm adenylylcyclase by SITSーaffinity chromatography." J.Biol.Chem.266. 17754-17759 (1991)
[Publications] Okamura,N.,Onoe,S.,Sugita,Y.,Paquignon,M.,Dacheux,F.,and Dacheux,J.ーL.: "Water insoluble fraction of egg yolk maintains porcine sperm motility by activating adenylate cyclase." Mol.Reprod.Develop.28. 136-142 (1991)
[Publications] Okamura,N.,Dacheux,F.,Venien,A.,Onoe,S.,Huet,J.ーC.,and Dacheux,J.ーL.: "Localization of a maturation dependent epididymal sperm surface antigen recognized by a monoclonal antibody raised against a 135 KDa protein in porcine epididymal fluid." Biol.Reprod.(1992)
[Publications] Nagai,T.,Miura,K.,Kikuchi,K.,and Okamura,N.: "Effects of caffeine on in vitro fertilization of pig follicular docytes."
[Publications] Okamura,N.,Tanba,M.Fukuda,A Sugita,Y.,and Nagai,T.: "Forskolin stimulates porcine sperm capacitation by increasing calcium uptake."
[Publications] Okamura,Fukuda,A.,Tanba,M.Sugita,Y.,and Nagai,T.: "Changes in the nature of calcium transport systems on the Porcine sperm plasma membrane during epididymal maturation."
[Publications] Dacheux,J.ーL.,Okamura,N.,Chevrier,C.,Dacheux,F.,Jeulin,C.,Gatti,J.ーL.,and Paquignon,M.: "Comparative Spermatology" Raven Press,

1991 Fiscal Year Annual Research Report

精巣上体管上皮細胞との共存培養による精子成熟系の確立と、成熟の分子機構の解明

Principal Investigator

岡村 直道 筑波大学, 基礎医学系, 講師 (30134224)

Research Products

[Publications] Okamura,N.,Tajima,Y.,Onoe,S.,and Sugita,Y.: "Purification of bicarbonateーsensitive sperm adenylylcyclase by SITSーaffinity chromatography." J.Biol.Chem.266. 17754-17759 (1991)

[Publications] Okamura,N.,Onoe,S.,Sugita,Y.,Paquignon,M.,Dacheux,F.,and Dacheux,J.ーL.: "Water insoluble fraction of egg yolk maintains porcine sperm motility by activating adenylate cyclase." Mol.Reprod.Develop.28. 136-142 (1991)

[Publications] Okamura,N.,Dacheux,F.,Venien,A.,Onoe,S.,Huet,J.ーC.,and Dacheux,J.ーL.: "Localization of a maturation dependent epididymal sperm surface antigen recognized by a monoclonal antibody raised against a 135 KDa protein in porcine epididymal fluid." Biol.Reprod.(1992)

[Publications] Nagai,T.,Miura,K.,Kikuchi,K.,and Okamura,N.: "Effects of caffeine on in vitro fertilization of pig follicular docytes."

[Publications] Okamura,N.,Tanba,M.Fukuda,A Sugita,Y.,and Nagai,T.: "Forskolin stimulates porcine sperm capacitation by increasing calcium uptake."

[Publications] Okamura,Fukuda,A.,Tanba,M.Sugita,Y.,and Nagai,T.: "Changes in the nature of calcium transport systems on the Porcine sperm plasma membrane during epididymal maturation."

[Publications] Dacheux,J.ーL.,Okamura,N.,Chevrier,C.,Dacheux,F.,Jeulin,C.,Gatti,J.ーL.,and Paquignon,M.: "Comparative Spermatology" Raven Press,

岡村直道筑波大学, 基礎医学系, 講師 (30134224)