微生物のセロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼに関する研究

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03660116
• Research Institution: Osaka Prefecture University
• Principal Investigator: 荒井 基夫 大阪府立大学, 農学部, 教授 (80081537)
• Keywords: セロビオ-スフォスフォリラ-ゼ / セロデキストリンフォスフォラリ-ゼ / クロストリジウム / クロ-ニング

Research Abstract

セロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼの酵素の諸性質の解明とその応用を目的としてまず、セロビオ-スフォスフォリラ-ゼ生産菌の検索を行い、1細菌の分離(エルビニア属)に成功し、その酵素の性質の解明を行った。ついで、クロストリジウムサ-モセラムのセロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼノ精製を行い、酵素の諸性質も明らかにすることができた。本研究は以上の成果の上にたち、これらの酵素遺伝子のクロ-ニングを行い、酵素を大量に生産する系を構築し、酵素の利用を目的として計画されたものである。
クロストリジウムサ-モセラムの菌体内抽出液からセロビオ-ス及びセロデキストリンフォスフォリラ-ゼを各種カラムクロマトグラフィ-により精製した。ついで、これらのN末端付近アミノ酸配列をアミノ酸シクエンサ-で分析したところ、約40残基の配列を決定することができた。これをもとにして合成DNAプロ-ブをつくり、常法に従い遺伝子のクロ-ニングを行ったところ、3株の陽性株がとれた。しかし、塩基配列を調べたところ、プロ-ブ部分とは一致するが、他の部分の配列が一致せず目的の遺伝子ではないことが判明した。そこで現在、酵素蛋白をプロテア-ゼ等で断片化して、そのペプチドを高速液体クロマト等で純化し、それらのアミノ酸配列を調べている。この結果を利用して新たなプロ-ブを作り、遺伝子のクロ-ニングを行おうとしている。

Research Products

• [Publications] M.ARAI,K.TANAKA: "Purification and Characterization of cellobiosephosphorylase from Clostridium thermocellum" J.Biochem.
• [Publications] K.TANAKA,M.ARAI: "Purification and Characterization of cellodextrinphosphorylase from Clostスidium thermocellum" J.Biochem.