1991 Fiscal Year Annual Research Report
魚類病原菌の病原性に関与する遺伝子の構造解析と機能の解明
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03660198
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
青木 宙 宮崎大学, 農学部, 教授 (00051805)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北尾 忠利 宮崎大学, 農学部, 教授 (60094075)
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| Keywords | 魚類病原菌 / 病原性遺伝子 / 溶血素遺伝子 / Aeromonas hydrophila / Aeromonas Salmonicida / 溶血素 / 遺伝子の構造解析 / 菌体外毒素 |
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| Research Abstract |
本研究は魚類病原菌の病原性に関与する遺伝子の構造解析と機能の解明を行う。平成3年度の研究実積は以下の通りである。
Aeromonas hydrophila ATCC7966より2種類の溶血素遺伝子(AHH1,AHH2)およびA.salmonicida ATCC14174より1種類の容血素遺伝子(ASH1)がクロ-ニングできた。その内の溶血遺伝子AHH1ーAHH2の塩基配列を決定した。溶血素遺伝子AHH1は制限酵素BamHIーSphI約2.7kb断片上に存在した。タンパク質をコ-ドしている領域(ORF)の長さは1,734塩基よりなり、578のアミノ酸をコ-ドしていた。溶血素AHH1のN末端側の疎水性のアミノ酸配列が存在していた。溶血素遺伝子AHH2はKpnIーPstI約1.6kb断片上に存在した。ORFは981塩基よりなり326のアミノ酸をコ-ドしていた。両遺伝子ともORFの上流にはリボソ-ム結合部位およびプロモ-タ-領域である-35および-10領域が存在した。さらに、ORFの下流には転写終了のシグナルであるパリンドロミックな配列が確認できた。大腫菌を用いたマキシセル法で、両遺伝子がコ-ドしているタンパク質の分子量を測定した結果、溶血素AHH1およびAHH2の分子量はそれぞれ約60K、約26Kであった。両溶血素の大腫菌における菌体外への産生を調べた結果、溶血素AHH1は大腹菌の菌体外への産生が確認されたが、溶血素AHH2は大腫菌の菌体外への産生は認められなかった。両溶血素のアミノ酸配列を既知の微生物由来の溶血性タンパク質のアミノ酸配列と比較した結果、溶血素AHH1はVibrio cholerae El TorおよびV.vulnificusの溶血素と類似の配列が部分的に存在した。この類似の配列はビブリオ科の溶血性細胞毒特有の配列である。溶血素AHH2と類似の配列は存在しなかった。A.salmonicida ATCC14174よりクロ-ン化した溶血素遺伝子ASH1は制限酵素HindIII約2.8kb断片上に存在した。溶血素ASH1の分子量は約56Kであった。
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[Publications] T.Aoki and I.Hirono: "Cloning and characterization of the haemolysin determinants from Aeromonas hydrophila" J.Fish Diseases. 14. 303-312 (1991)
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[Publications] I.Hirono and T.Aoki: "Nucleotide sequence and expression of an extracellular hemolysin gene of Aeromonas hydrophila" Microbial Pathogensis. 11. 189-197 (1991)
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[Publications] I.Hirono and T.Aoki: "Cloning and expression of a haemolysin gene from Aeromonas salmonicida ATCC 14174" Proceedings of the first Symposium on Diseases in Asian Aquaculture. (1992)
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[Publications] T.Aoki: "Hemolysin gene of Aeromonas Salmonicida" Oji International Symposium on Salmonid Diseases. (1992)
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[Publications] T.Aoki and I.Hirono: "Cloning of hemolysin genes of aeromonads" Proceedings of the 19th U.S.ーJapan Meetings on Aquaculture. (1992)
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[Publications] I.Hirono,T.Aoki,T.Asao and S.Kozaki: "Nucleotide sequences and characterization of hemolysin genes from Aeromonas hydrophila and A.sobria" Infection and Immunity.
