1993 Fiscal Year Annual Research Report
抗高脂血漿剤で誘導される新たに見出した肝アセチルCoA水解酵素の医化学的研究
| Project/Area Number |
03670123
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
礒橋 文秀 大阪大学, 医学部, 講師 (20115992)
|
|---|
| Keywords | アセチルCoA水解酵素 / 抗高脂血薬剤 / パーオキシゾーム増殖 / クロフィブレート / ノンゲノトキシック発癌 / ステロイドホルモンレセプター / クロフィブレートレセプター / レセプタースーパーファミリー |
|---|
| Research Abstract |
本年度は、報告者により発見された肝細胞質型アセチルCoA水解酵素をラット肝より、単一にかつ多量に精製する方法を新たに開発した。この純品酵素を多量に用いて家兎に免疫し、昨年度に調整した抗体よりさらに力価と特異性の高いポリクローナル抗体を得ることが出来た。本抗体を用いて、ウエスタンブロット法を行うと、細胞質画分の本粗酵素を感度よく、特異的に定量することが可能となった。
近年、抗高脂血薬剤(パーオキシゾーム増殖剤)クロフィブレートはステロイドホルモンレセプターと類似した細胞内レセプターをトランスジューサーとする遺伝子発現調節機構を介して作用を発現している事が明らかにされて来た。本酵素はクロフィブレート投与で著名な酵素活性の増大が認められる。0.5%クロフィブレート含有食を18ケ月間投与したラット肝の本酵素をウエスタンブロット法で解析すると、本酵素蛋白は約4倍にも増大し、誘導を受けていることが明らかとなった。以上より、本酵素はクロフィブレートのマーカー酵素となりえ、更にパーオキシゾーム増殖機構やノンゲノトキシック発癌機構解明に有用な手段を提供すると考えられる。更にウエスタンブロット法でパーオキシゾームに存在する本酵素を解析したが、細胞質型酵素と免疫化学的にも分子量的にも異なっていなかった。生化学的にも細胞質型の特性を備えており、同一酵素であることが示唆された。
一方、本酵素のcDNAより一次構造解析の為、多量精製した単一酵素をV8プロテアーゼとリシンエンドペプチアーゼでペプチド断片に分解し、N末アミノ酸配列を決定した。現在このアミノ酸配列より、ラットmRNAから本アセチルCoA水解酵素のcDNAを増幅させ、本酵素の一次構造の決定作業を行なっている。マイクロシークエンスで得たアミノ酸配列のデータバンク解析で、本蛋白は新規の蛋白質である事が判った。
|
-
[Publications] Kazuki Okamoto: "Rat Hepatic ATP-Stimulated Translocation Promoter That Increases The Nuclear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor Complex." Neuroendocrine Research Methods. 2. 635-672 (1991)
-
[Publications] Yoko Nakanishi: "Effects of Chronic Administration of the Peroxisome Proliferator,Clofibrate,on Cytosolic Acetyl-CoA Hydrolase in Rat Liver." Biochemical Pharmacology. 45. 1403-1407 (1993)
-
[Publications] Kazuki Okamoto: "Molecular Cloning of Rat Liver Glucocorticoid-Receptor Translocation Promoter:" Biochem.Biophys.Res.Commun.193. 848-854 (1993)
-
[Publications] Fumihide Isohashi: "ATP-Stimulated Translocation Promoter that Enhances the Nuclear Binding of Activated Glucocorticoid Receptor Complex:Biochemical Properties and Its Function." Receptor. 3. 113-124 (1993)
-
[Publications] Gang Liu: "Purification and Characterization of a Macromolecular Translocation Inhibitor III of Activated Glucocorticoid Receptor Complex Binding to Nuclei from Rat Liver:" Eur.J.Biochem.218. 679-687 (1993)
-
[Publications] Yoko Nakanishi: "Subcellular Distribution of ATP-Stimulated and ADP-Inhibited Acetyl-CoA Hydrolase in Livers from Control and Clofibrate-Treated Rats;Comparison of the---" J.Biochem.115 in press. (1994)
-
[Publications] 礒橋文秀: "新生化学実験講座 9 ホルモンII 非ペプチドホルモン[日本生化学会(村松正實編集)編]" 東京化学同人, 536 (1993)
-
[Publications] 上田清隆、岡本一起、礒橋文秀: "生物薬科学実験講座 第9巻 ホルモン・生理活性物質" 株式会社廣川書店(印刷中), (1994)
