1991 Fiscal Year Annual Research Report
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03670128
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| Research Institution | 大分医科大学 |
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Principal Investigator |
指吸 俊次 大分医科大学, 医学部, 助教授 (00019564)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
調 恒明 大分医科大学, 医学部, 助手 (50179058)
田村 実 大分医科大学, 医学部, 助手 (00128349)
竹下 正純 大分医科大学, 医学部, 教授 (50019551)
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| Keywords | シトクロムb_5 / cDNAクロ-ニング / 脳における機能 / 脳での局在部位 |
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| Research Abstract |
本研究では脳に特異的なシトクロムb_5の複数の分子種をcDNAクロ-ニングとその構造決定により同定し、大腸菌でのcDNA発現系を用いてそれぞれのタンパク質を大量に発現させて性質を調べ、それらの構造と機能を対応させようとするものである。肝ミクロソ-ムのシトクロムb_5は種々の機能を果たすことが知られており、これまで1種類のシトクロムb_5が機能しているように考えられてきたが、最近の様々な研究報告は構造の異なるシトクロムb_5が存在することを示唆している。
本年度の研究では脳に存在すると考えられるシトクロムb_5の新分子種(ブタ脳では3種類あることを確認している)を同定するために、現有しているヒト肝シトクロムb_5のcDNAを用いてヒト脳、マウス脳のcDNAライブラリ-からハイブリダイゼ-ション法により複数種のcDNAを得るべくスクリ-ニングを行なった。またこれと並行してシトクロムb_5に対する抗体を用いて脳のλgt11発現cDNAライブラリ-から複数の陽性クロ-ンをスクリ-ニングする実験を行なってきた。まだいづれの方法によっても陽性のクロ-ンが取れていない。原因として考えられるのは、(1)脳ミクロソ-ム自体が肝臓の1/10位しかなく、またそのミクロソ-ム中のシトクロムb_5自体の含量も低いこと、(2)シトクロムb_5cDNAに偽遺伝子が多いらしいこと(肝臓のcDNAライブラリ-についてPCR法でb_5cDNAのクロ-ニングを試みたが偽遺伝子が取れた)ことなどが考えられる。現在これまで行なった実験条件の再検討と、力価の高いシトクロムb_5抗体を得るため新たに抗体を作成中である。またシトクロムb_5抗体を用いた免疫染色法で脳内のシトクロムb_5の局在部位を同定するべく研究を進めている。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Yubisui Toshitsugu: "Structural Role of Serine 127 in the NADHーbinding site of Human NADHーcytochrome b_5 Reductase" Journal of Biological Chemistry. 266. 66-70 (1991)
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[Publications] Katsube Takanori: "Exonic Point Mutations is NADHーcytochrome b_5 Reductase Genes of Heterozygotes for Hereditary Methemoglobinemia Type I and III." American Journal of Human Genetics. 48. 799-808 (1991)
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[Publications] Shirabe Komei: "Role of Cysteine Residues in Human NADHーcytochrome b_5 Reductase Studied by Siteーdirected Mutagenesis" Journal of Biological Chemistry. 266. 7531-7536 (1991)
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[Publications] Shirabe Komei: "Roles of Four Cysteine Residues and Lysine 110 in Human NADHーcytochrome b_5 Reductase Studied by Siteーdirected Mutagenesis" Flavins and Flavoproteins Proceedings of the 10th International Symposium. 491-494 (1991)
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[Publications] Yubisui Toshitsugu: "Studies on the Role Serineー127 in NADHーcytochrome b_5 Reductase by Siteーdirected Mutagenesis" Flavins and Flavoproteins Proceedings of the 10th International Symposium. 856-858 (1991)
