1991 Fiscal Year Annual Research Report

細胞機能発現におけるジアルシルグリセロ-ルキナ-ゼアイソザイムの役割

Research Project

Project/Area Number	03670129
Research Institution	Sapporo Medical University
Principal Investigator	山田恵子札幌医科大学, 医学部, 講師 (80045541)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	今井伸一札幌医科大学, 医学部, 助手 (20213209) 坂根郁夫札幌医科大学, 医学部, 講師 (10183815) 加納英雄札幌医科大学, 医学部, 教授 (70045475)
Keywords	ジアシルグリセロ-ル(DG)キナ-ゼ / 刺激情報伝達系 / DGキナ-ゼアイソザイム / 亜鉛フィンガ- / EーFハンド / Tーリンパ球 / ホスファチジン酸
Research Abstract	1.Tリンパ球における80kDa DGキナ-ゼの活性化機構……精製80kDa DGキナ-ゼの活性化因子であるスフィンゴシンが無傷Jurkat細胞においても、内因性(長鎖)と外因性の短鎖(diC8)DGのリン酸化をともに亢進させることを見いだした。さらに最近細胞内リン酸化に複数のアイソザイムが関与している可能性が示唆されたので、異なる基質(diC10,C18:0/C20:4DG)と活性測定法(オクチルグルコシド混合ミセル法とDOC法)を用いて、Jurkat細胞のシトソ-ルと膜に存在するDGキナ-ゼを酵素学的、免疫学的方法で比較検討した。その結果、細胞内分布、DG分子種特異性、スフィンゴシンの効果、抗80kDa DGキナ-ゼ抗体との反応性などの点で区別できる少なくとも4種のDGキナ-ゼアイソザイムが存在することが分かった。この結果は本年度の生化学会で発表し、現在投稿準備中である。 2.80kDa DGキナ-ゼの機能部位の解析……本酵素の一次構造にはEーFハンド、亜鉛フィンガ-、両親媒性のαーヘリックス、ATP結合部位等の構造が存在する。まずEーFハンド構造に着目し、この酵素はCa^<2+>と結合する事がbinding assayからわかった。(J.Biol.Chem.266,7096(1991))。また種々の欠失変異や点変異を導入したcDNAを、大腸菌またはCOS細胞で発現させて能能を解析した。(Biochem.Biophys,Res.Commun.181,1015,(1991)) 3.DGキナ-ゼアイソザイムの一次構造決定……ヒトおよびブタ80kDa DGキナ-ゼのcDNAクロ-ンをプロ-ブにしてヒトおよびブタ脳、胸腺、脾臓のライブラリ-をスクリ-ニング中である。 4.購入したマイクロ冷却遠心機は、DGキナ-ゼの活性測定、プラスミドDNA,φDNAの調製などの際に使用している。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Sakane,F.: "Porcine 80ーkDa diacylglycerol kinase is a calciumーbinding and calcium/phospholipid dependent enzyme and undergoes calcium dependent translocation." J.Biol.Chem.266. 7096-7100 (1991)
[Publications] Sakane,F.: "The reguratory role of EFーhand motifs of pig 80k diacylーglycerol kinase as assessed using truncation and deletion mutants." Biochem.Biophys.Res.Commuun.181. 1015-1021 (1991)
[Publications] Kanoh,H.: "Diacylglycerol kinase isozymes from brain and lymphoid tissues." Methods in Enzymol.209. 162-172 (1992)
[Publications] 坂根郁夫: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼの一次構造と活性調節" 蛋白質核酸酵素. 36. 290-298 (1991)
[Publications] 加納英雄: "ジグリセリドキナ-ゼーカルシウムセンサ-をもつ情報伝達制御因子" 代謝. 28. 101-106 (1991)
[Publications] 山田恵子: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼ新生化学実験講座4(日本生化学会編)" 東京化学同人, 355-366 (1991)
[Publications] 加納英雄: "DGキナ-ゼ Neuroscience講座V(竹縄忠臣、野村靖幸編)" 廣川書店,
[Publications] 坂根郁夫: "DGキナ-ゼ生物薬科学講座IV(石橋貞彦、寺田弘編)" 廣川書店,

1991 Fiscal Year Annual Research Report

細胞機能発現におけるジアルシルグリセロ-ルキナ-ゼアイソザイムの役割

Principal Investigator

山田 恵子 札幌医科大学, 医学部, 講師 (80045541)

Research Products

[Publications] Sakane,F.: "Porcine 80ーkDa diacylglycerol kinase is a calciumーbinding and calcium/phospholipid dependent enzyme and undergoes calcium dependent translocation." J.Biol.Chem.266. 7096-7100 (1991)

[Publications] Sakane,F.: "The reguratory role of EFーhand motifs of pig 80k diacylーglycerol kinase as assessed using truncation and deletion mutants." Biochem.Biophys.Res.Commuun.181. 1015-1021 (1991)

[Publications] Kanoh,H.: "Diacylglycerol kinase isozymes from brain and lymphoid tissues." Methods in Enzymol.209. 162-172 (1992)

[Publications] 坂根 郁夫: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼの一次構造と活性調節" 蛋白質核酸酵素. 36. 290-298 (1991)

[Publications] 加納 英雄: "ジグリセリドキナ-ゼーカルシウムセンサ-をもつ情報伝達制御因子" 代謝. 28. 101-106 (1991)

[Publications] 山田 恵子: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼ 新生化学実験講座4(日本生化学会編)" 東京化学同人, 355-366 (1991)

[Publications] 加納 英雄: "DGキナ-ゼ Neuroscience講座V(竹縄忠臣、野村靖幸編)" 廣川書店,

[Publications] 坂根 郁夫: "DGキナ-ゼ 生物薬科学講座IV(石橋貞彦、寺田弘編)" 廣川書店,

山田恵子札幌医科大学, 医学部, 講師 (80045541)

[Publications] 坂根郁夫: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼの一次構造と活性調節" 蛋白質核酸酵素. 36. 290-298 (1991)

[Publications] 加納英雄: "ジグリセリドキナ-ゼーカルシウムセンサ-をもつ情報伝達制御因子" 代謝. 28. 101-106 (1991)

[Publications] 山田恵子: "ジアシルグリセロ-ルキナ-ゼ新生化学実験講座4(日本生化学会編)" 東京化学同人, 355-366 (1991)

[Publications] 加納英雄: "DGキナ-ゼ Neuroscience講座V(竹縄忠臣、野村靖幸編)" 廣川書店,

[Publications] 坂根郁夫: "DGキナ-ゼ生物薬科学講座IV(石橋貞彦、寺田弘編)" 廣川書店,