ヒト大腸癌細胞への段階的染色体移入による癌抑制遺伝子の研究

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03670186
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• Principal Investigator: 田中 貴代子 東京都臨床医学総合研究所, 腫瘍生化学, 研究員 (40124474)
• Keywords: 大腸癌 / 染色体移入 / 癌抑制遺伝子

Research Abstract

大腸癌の発生には複数の癌抑制遺伝子の不活化が関与していることが明らかになってきている。既に5番染色体上のAPC遺伝子、17番染色体上のp53遺伝子、18番染色体上のDCC遺伝子がクロ-ン化されたが、染色体およびRFLP分析の結果より1番染色体、22番染色体にも癌抑制遺伝子の存在が示唆されている。そこで、本研究では正常ヒト染色体1本を含む細胞を供与体として、樹立したヒト大腸癌細胞へ微小核融合法により、異なる選択マ-カ-を用いて二段階で複数の正常ヒト染色体を移入し、この間に得られた移入染色体の異なるクロ-ンの性質を調べることにより、癌細胞の造腫瘍性を抑制する染色体を同定しヒトの発癌における抑制遺伝子の役割を究明することを目的とした。
HGPRT遺伝子を含むX染色体の一部が17番へ転座したXー17染色体を微小核融合法により17番、18番、22番染色体で欠失が認められている大腸癌細胞へ移入するために、MNNG処理後6TGを含む培地中で選択培養を行い耐性細胞(FuTG)を得た。この細胞が元の大腸癌の性質を保持しているかどうかを17番染色体上のDNAマ-カ-を用いて対立遺伝子欠失を調べると共にヌ-ドマウスにおける造腫瘍性を調べ確認した。FuTGにヒト正常細胞由来のXー17転座染色体を微小核融合法により移入し、HAT培地で選択培養を行い耐性細胞を得た。細胞形態はFuTGは紡錘形を示すのに対し、17番染色体移入細胞は多角形に変化した。また、15%牛胎児血清存在下での細胞増殖速度はFuTGと変わりなかったが、軟寒天培地中でのコロニ-形成能は著しく低下した。現在6TG存在下で培養を行いリバ-タントを取ることを試みると共に、ヌ-ドマウスにおける造腫瘍性を調べている。今後このクロ-ンにNeoで標識された他の染色体を移入する予定である。

Research Products

• [Publications] Tanaka,K.et al.: "Suppresion of tumorigenicity in human colon carcinoma cells by introduction of normal chromosome 5 of 18." Nature. 349. 340-342 (1991)
• [Publications] Seki,M.,Tanaka,K.et al.: "Loss of allele of the APC gene in adrenocortical carcinoma from a patient in a family of adenomatous polyposis." Hum.genet.(1992)
• [Publications] 田中 貴代子他: "染色体移入により癌形質の抑制" 実験医学. 9. 59-62 (1991)
• [Publications] 宮木 美知子,田中 貴代子他: "家族性大腸ポリポ-シス" 代謝. 28. 29-37 (1991)