1991 Fiscal Year Annual Research Report
免疫グロブリン遺伝子の発現を抑制するサイレンサ-因子遺伝子のクロ-ニング
| Project/Area Number |
03670252
|
|---|
| Research Institution | Kyushu University |
|---|
Principal Investigator |
中島 学 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (50198074)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北村 大介 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (70204914)
|
|---|
| Keywords | イントロン・エンハンサ- / サイレンサ- / 免疫グロブリン遺伝子 / 転写調節 |
|---|
| Research Abstract |
我々はヒトH鎖遺伝子インストロンエンハンサ-3'側に新たなB細胞特異的な転写調節エレメンド「E6」を同定した。E6はそれ単独でB細胞内でエンハンサ-活性を示すが,HeLa細胞等の非リンパ球細胞では逆にサイレンサ-として働くことを我々は見い出した。本研究ではこのような特異的な転写調節活性を有するE6エレメントに作用するトランスアクティングな核内因子をコ-ドする遺伝子の単離を試みた。
neo遺伝子にconalbumin遺伝子のプロモ-タ-を結合させその上流にE6エレメントを6コピ-結合したリポ-タ-遺伝子を構築した。このリポ-タ-遺伝子とハイグロマイシン遺伝子を同時にHeLa細胞にトランスフェクションし,ハイグロマイシンで選択し安定形質転換株を樹立した。形質転換株のうちneoリポ-タ-遺伝子が1〜2コピ-組み込まれたneomycin感受性を有する細胞株を次に選択した。ヒトB細胞cDNAライブラリ-,マウス骨髄腫cDNAライブラリ-を作製し,SRαプロモ-タ-・エンハンサ-をもつベクタ-に組み込み,これをリポ-タ-遺伝子をあらかじめ導入してある上記のHeLa形質転換細胞にトランスフェクションし,ネオマイシンにて選択を行った。得られたneo耐性細胞株について,cDNA用ベクタ-DNAがゲノム遺伝子に組み込まれている細胞を選択的に取り出した。この細胞のDNAよりベクタ-DNAをプロ-ブとしてcDNAの単離を行った。得られたcDNAが確かに形質転換細胞で発現されている事を確かめた後,現在,この方法によりE6エレメントに作用する核内DNA結合蛋白の遺伝子のクロ-ニングを行っている。
|
Research Products
(3 results)
-
[Publications] M.Nakashima,Y.Nishimura,T.Watanabe.: "Recombinant humanーmouse chimeric monoclonal antibody specific for human adenocarcinoma associated antigen." Hybridoma. 10. 1-9 (1991)
-
[Publications] K.Mori,K.Hirata,M.Kawabuchi,M.Nakashima,T.Watanabe.: "A novel MHC classIーrelated molecule expressed on mouse thymic stroma cells and mature lymphocytes" Immunogenetics. 33. 101-107 (1991)
-
[Publications] M.Nakashima,T.Watanabe,H.Koprowski,L.Schuchter,Z.Steplewski.: "In vitro expansion of melanoma specific,HLA restricted CD8+ cytotoxic T lymphocytes." Proc.Ntal.Acad.Sci.U.S.A..
