抗ペルオキシダ-ゼ/抗アルカリホスファタ-ゼハイブリッド抗体の法医学的応用

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03670300
• Research Institution: 大分医科大学
• Principal Investigator: 玉置 嘉広 大分医科大学, 医学部, 教授 (20028377)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岸田 哲子 大分医科大学, 医学部, 助教授 (50136793)
• Keywords: 二重特異性モノクロ-ナル抗体 / 抗ペルオキシダ-ゼ抗体 / 抗アルカリホスファタ-ゼ抗体 / 抗スルホン化DNA抗体 / DNAフィンガ-プリント / ハイブリッド・ハイブリド-マ

Research Abstract

〔HAT感受性抗ペルオキシダ-ゼ抗体産生融合株の樹立〕ペルオキシダ-ゼ(HRP,20μg)で免疫したマウスの膝窩リンパ節細胞をP3U1骨髄腫細胞と融合させ,無血清培地ASF103で培養した。常法にしたがって選別,クロ-ン化後,抗HRP産生融合細胞株を樹立した。この細胞株を1週間8ーAzaguanine存在下で培養すると大部分死滅し約5%が生き残った。これを拡大培養した酵素HGPRT欠損株(すなわちHAT感受性株)とした。
〔HAR感受性抗スルホン化DNA(SDNA)抗体産生融合細胞株の樹立〕マウスDNA断片をメタ重亜硫酸Naとメチルヒドロキシラミンでスルホン化した後BSAと結合させたものでマウスを免疫し,そのリンパ節細胞の一部をP3U1細胞と融合させ,上記の方法でHAT感受性抗SDNA産生株を樹立した。
〔抗HRP/抗SDNA二重特異性ハイブリッド抗体産生株の樹立〕HAt感受性抗HRP産生株と抗SDN抗体産生細胞を融合させ,HAT選択後,二重特異性ハイブリッド抗体産生Triomaを樹立した。〔ハイブリッド抗体によるDNAフィンガ-プリントの検出〕ヒトのゲノムDNAのEcoR 断片を電気泳動し,スルホン化DNAプロ-ブとサザンハイブリダイズさせ,これをHRPと(HRPカラムで精製した)前記ハイブリッド抗体で検出すると,明瞭なDNAフィンガ-プリントが得られた。
〔その他のハイブリッド抗体〕マウスをアルカリホスファタ-ゼで免疫し,そのリンパ節細胞を前記二種類のHAT感受性抗体産生株と融合させてTriomaを作製したが,目的とする二重特異性抗体(ハイブリッド抗体)はまだ得られていない。抗ALP抗体が活性中心をブロックしているためだと思われる。

Research Products

• [Publications] Yoshihiro TAMAKI: "Production of antiーsulfonated DNA/antiーperoxidase bispecific monoclonal antibody" Journal of Immunological Methods.
• [Publications] Yoshihiro TAMAKI: "Efficient Methods for preparation of monoclonal antibodies for forensic applications" International Journal of Legal Medicine.