炎症性腸疾患の免疫異常に関する、腸管局所のサイトカイン遺伝子レベルからの解析

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03670345
• Research Institution: TOHOKU UNIVERSITY
• Principal Investigator: 樋渡 信夫 東北大学, 医学部, 助手 (00133950)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山崎 日出雄 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (80221654)
• Keywords: 炎症性腸疾患 / クローン病 / 潰瘍性大腸炎 / サイトカイン / mRNA / PCR法 / TNFα / TNFβ

Research Abstract

我々は、炎症性腸疾患(IBD)病変部のTNFα、TNFβ mRNAレべルでの発現調節について、大腸粘膜からRNAを抽出し、逆転写酵素によりcDNAに変換後、polymerase chain reaction(PCR)法を用いるRT-PCR法によって解析した。[方法]1)内視鏡下に得られたIBD病変部、非病変部、対照者粘膜(HD)からguadinium thiocyanate-phenol法によりtRNAを抽出し、逆転写酵素によりcDNAに合成後,PCRを施行した。TNFαprimerで325bp、TNFβprimerは375bpの増幅PCR産物を得た。mRNAレベルの発現量は内部標準としてβ-actin,T-cell receptor α鎖、pAW109RNA templateを使い、目的遺伝子と同時に増幅する定量的PCRを用い測定した。2)大腸粘膜の器官培養を行い、immuno-assay法でTNFα,TNFβ産生能を測定した。3)器官培養下に腸内細菌壁成分のLPS(10μg/ml)を添加後、粘膜からtRNAを抽出しTNFmRNAレベルの変動を測定した。[結果]1)β-actinを内部標準としたmRNA遺伝子の定量では、クローン病(CD)、遺瘍性大腸炎(UC)の病変部粘膜で、HDに比しTNFαmRNAは32〜64倍、TNFβmRNAは4〜16培の発現量を示した。IBD活動期の非病変部粘膜では、HDに比べTNFαmRNAの発現量が高まっていた。2)CD,UC病変部粘膜でのTNFα産生量はCD23096pg/g tissue,UC29004と、HD807に比して増大していた。TNFβ産生量はCD2414pg/g,UC2357とHD1504に比して僅かな増加を示した。3)IBD粘膜のLPS添加群は、非添加群に比べ4〜8倍のTNFαmRNAの発現増加を示したが、TNFαmRNAは変化を認めなかった。[まとめ]IBD活動期非病変部粘膜でもTNFαmRNAの発現は高まっており、また腸内細菌壁成分LPSによりその発現量の増加を認め、病変進展の準備状態にあることが示唆された。

Research Products

• [Publications] M.Noguchi: "Cytokines and adhesion molecule induces multinncleated giant cells formationi n Crohins disease" gastroenterology. 102. A672- (1992)
• [Publications] M.Noguchi: "Regulation of TNFα and TNFβ gene expression in inflammatory bowel disease" gastroenterology. 104. (1993)