1992 Fiscal Year Annual Research Report
高コレステロール血症におけるアポ蛋白DNA転写昂進機序に関する研究
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03671128
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| Research Institution | The University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
松島 照彦 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (60199792)
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| Keywords | アポ蛋白E / 高コレステロール血症 / DNA / 遺伝子転写 / 調節因子 / モルモット / CATアッセイ / サウスウェスタンブロット |
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| Research Abstract |
【序論】アポ蛋白Eはコレステロールに富むリポ蛋白の代謝に重要な役割をはたしている。高コレステロール食負荷時に見られるアポ蛋白Eの合成分泌の亢進は負荷に対してその異化を促進するための合目的的な反応と考えられる。本研究はモルモットのコレステロール負荷時に見られるアポ蛋白E合成亢進の機序を遺伝子DNAレベルで解析することを目的とし、本年度は転写活性の検討を中心に研究を行った。【方法】モルモットを通常飼料、または高コレステロール食で4週間飼育した。モルモットの肝臓より核蛋白試料を調製し、アポ蛋白E遺伝子DNAの5'上流制御領域との結合を解析した。アポ蛋白E遺伝子DNAの5'上流制御領域から第2エクソン翻訳開始コドン(ATG)の直上流までの断片を用意し、CATベクターに組み込んだ。リン酸カルシウム共沈法によりDNAを培養肝細胞に導入、形質転機し、培養肝細胞系において発現されたCAT活性を測定した。【結果】ゲルシフト法、フットプリント法、サウスウェスタン法においてDNA-核蛋白間に特異的結合がみられ、33kDaに観察される結合はアポ蛋白E合成制御に関連した蛋白である可能性が示唆された。初代培養肝細胞系を用いたCATアッセイにおいて、アポ蛋白E遺伝子DNA5'上流に転写活性が認められた。この転写活性は、普通飼料飼育動物からの培養肝細胞では弱く、コレステロール負荷動物からの培養肝細胞で強い発現が見られた。【結論】本研究によりアポ蛋白E合成はコレステロール負荷により遺伝子転写レベルで調節されている事が明らかになり、肝核蛋白中にはアポ蛋白EDNA転写活性を調節する因子が存在し、33kDaの結合蛋白が調節因子である可能性が示唆された。ステロール負荷により転写亢進を起こす機構はこれまで報告が無く、本研究の成果は高脂血症の治療、予防にも貢献しうるものと期待される。
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Research Products
(1 results)
