GRF及びソマトスタチン受容体cDNAクロ-ニングとその末端肥大症腺腫での発現

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03671151
• Research Institution: Kobe University
• Principal Investigator: 阿部 廣己 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (20159437)
• Keywords: GFR / ソマトスタチン / 受容体 / 分子生物学 / cDNAクロ-ニング / 末端肥大症 / 下垂体腺腫

Research Abstract

既知のG蛋白共役型受容体の塩基配列のうち膜貫通領域でhomologyの高い部分をMacvectorDNA解析プログラムで検索し、2、3、5、6、7番の招貫通領域でイノシンを用いたdegenerate primerを作製した。これらprimerを種々に組み合わせたPRCで、クロンテック社の末端肥大症腺腫のcDNAライブラリ-、及び我々の病院で摘出された末端肥大症腺腫から作ったcDNAライブラリ-から未知G蛋白共役型受容体のDNA断片の増幅を試みた。ただ、これらのライブラリ-には質、量的に限界がある可能性もあるので、最近、井上らによって確立されたGRF受容体を持つラツト下垂体腺腫のcell lineであるMtTーSの提供を受け、このcell lineからもcDNAライブラリ-を作製し、スクリ-ニングの対象にくわえた。3番と6番の膜貫通領域のprimerでPCRを行った所、G蛋白共役型受容体の一部として妥当なサイズの0.5ー1.0KbのPCR産物をえたので、このバンドを分離し、subcloningした。DNA sequencerを用いた、dye primer法による塩基配列の決定で、既知のG蛋白共役型受容体とhomologyの高い2っのクロ-ンを得た。このDNA断片のアミノ酸配列を解析すると2っの膜貫通領域と思われる疎水性の強い領域が認められ未知G蛋白共役型受容体の可能性が高かった。さらに、このcDNAの全塩基配列を決定すべく、得られたDNA断片をprimerとして、cDNAライブラリ-のプラ-クハイブリゼ-ションを行って、数個の陽性プラ-クを単離した。現在、これらの塩基配列を決定しつつあり、さらにfull cDNA近い物であれば、発現ベクタ-に組み込んで、transfection後、結合実験を行い目標とする、GRFもしくは、ソマトスタチンの受容体であるかどうか検討する。

Research Products

• [Publications] 阿部 廣己: "最新内科学大系17巻「視床下部ホルモンと消化管」" 中山書店, 5 (1993)
• [Publications] 阿部 廣己,千原 和夫: "躁鬱病と神経内分泌「下垂体機能検査」" 学会出版センタ-, 12 (1992)