1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血因子の情報伝達系の解析とその制御機構に関する研究

Research Project

Project/Area Number	03671186
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	金倉譲大阪大学, 医学部, 助手 (20177489)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	金山良男大阪大学, 医学部, 講師 (30158852)
Keywords	チロシンキナ-ゼ / チロシンフォスファタ-ゼ / GMーCSF / ILー3 / Cーkit / 急性骨髄性白血病 / 血液幹細胞 / Rafー1
Research Abstract	ヒト急性巨核球性白血病細胞より樹立されたM07細胞は、GMーCSFやILー3依存性に増殖する細胞株である。GMーCSFあるいはILー3でM07細胞を刺激すると、細胞質内蛋白(pー93やp70等)のチロシンリン酸化が認められた。チロシンフォスファタ-ゼ阻害剤は、これらの分子のチロシンリン酸化を増強し、しかもM07細胞の増殖も増強した。一方、プロテインキナ-ゼC活性化剤であるフォルボ-ルエステル(PMA)は、細胞内基質であるp93のチロシンリン酸化を抑制しM07細胞のGMーCSFによる増殖も抑制した。GMーCSFやILー3は上記チロシンキナ-ゼを活性化するばかりでなく、セリン・スレオニンキナ-ゼの一種であるRafー1癌原遺伝子産物のリン酸化ならびに活性化を引き起こした。一方、マウス線維芽細胞(Balb/3T3)はM07細胞の増殖を促したが、この増殖刺激活性は線維芽細胞の培養上清中(FCM)にも検出された。このFCMによるM07細胞の増殖は、チロシンキナ-ゼ阻害剤ゼニスチンにより完全に阻害され、FCMによる増殖にはチロシンキナ-ゼの関与が示唆された。抗リン酸化チロシン抗体ならびに抗cーkit抗体を用いた解析により、FCMによるM07細胞の増殖にはcーkit蛋白のチロシンリン酸化と活性化が重要な役割を担っている事が明かとなった。FCMの代わりにcーkitリガンドであるstem cell factor(SCF)を用いても同様の知見が得られた。さらに、各種AML細胞を用いてcーkitの発現を検討した。AML25例(80%)にcーkitのmRNAと蛋白の発現が認められた。しかし、cーkitの発現とFAB分類あるいは病像の間に有意の相関は認められなかった。cーkit蛋白を発現している11例のAML中6例でSCFはAML細胞の増殖を促し、しかもGMーCSFとの相乗効果が認められた。また、SCF刺激前より12例中7例に軽度ではあるがcーkit蛋白のチロシンリン酸化が認められた。以上のように、血球の増殖には造血因子によるチロシンキナ-ゼ・チロシンフォスファタ-ゼの活性化が極めて重要であると考えられる。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Y.Kanakura: "Granulocytoーmacrophage colonyーstinwlating factor and interleukinー3 induce rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in a human factorーdependent myeloid cell line." Blood. 77. 243-248 (1991)
[Publications] Y.Kanakura: "Phorbol 12ーmyristate 13ーacetate tnhibits granulocyteーmacrophage colonyーstimulating factorーinduced protein tyrosine phosphorylation in a human factorーdependent cell line." J.Biol.Chem.266. 490-495 (1991)
[Publications] Y.Kanakura: "ldentification of functionally distinot domains of human granulocyteーmacropnage colonyーstimulating bactor using monoclonal antibodies." Blood. 77. 1033-1043 (1991)
[Publications] A.Kuriu: "Proliferation of human myeloid leukemia cell line associated with the tyrosineーphosphorylation and activation of the protoーoncogene cーkit product." Blood. 78. 2834-2840 (1991)
[Publications] H.Ikeda: "Expression and functional role of theーprotoーoncagene cーkit in acute myelo blnstic leukemia cells." Blood. 78. 2962-2968 (1991)
[Publications] T.Tamaki: "Surface immunoglobullnーmediated signal trans duction involves rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in human B cells." Cancer Res.52. 566-570 (1992)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血因子の情報伝達系の解析とその制御機構に関する研究

Principal Investigator

金倉 譲 大阪大学, 医学部, 助手 (20177489)

Research Products

[Publications] Y.Kanakura: "Granulocytoーmacrophage colonyーstinwlating factor and interleukinー3 induce rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in a human factorーdependent myeloid cell line." Blood. 77. 243-248 (1991)

[Publications] Y.Kanakura: "Phorbol 12ーmyristate 13ーacetate tnhibits granulocyteーmacrophage colonyーstimulating factorーinduced protein tyrosine phosphorylation in a human factorーdependent cell line." J.Biol.Chem.266. 490-495 (1991)

[Publications] Y.Kanakura: "ldentification of functionally distinot domains of human granulocyteーmacropnage colonyーstimulating bactor using monoclonal antibodies." Blood. 77. 1033-1043 (1991)

[Publications] A.Kuriu: "Proliferation of human myeloid leukemia cell line associated with the tyrosineーphosphorylation and activation of the protoーoncogene cーkit product." Blood. 78. 2834-2840 (1991)

[Publications] H.Ikeda: "Expression and functional role of theーprotoーoncagene cーkit in acute myelo blnstic leukemia cells." Blood. 78. 2962-2968 (1991)

[Publications] T.Tamaki: "Surface immunoglobullnーmediated signal trans duction involves rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in human B cells." Cancer Res.52. 566-570 (1992)

金倉譲大阪大学, 医学部, 助手 (20177489)