1991 Fiscal Year Annual Research Report
血液凝固VII因子とIX因子の第1EGF様ドメインに発見された新しい糖鎖の意義
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03808023
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
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| Keywords | 血液凝固VII因子 / 血液凝固IX因子 / EGF様ドメイン / オリゴ糖鎖 / グリコシダ-ゼ |
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| Research Abstract |
Serー52に結合した糖鎖の役割を調べる目的で、種々のグリコシダ-ゼを用いて、糖鎖をタンパク質分子から取り除くことを試みた。ウシIX因子から調製したペンタペプチドGluーSer(GlcーXylーXyl)ーAsnーProーaminoethylCysに対してαーキシロシダ-ゼ、βーキシロシダ-ゼ、Oーグリカナ-ゼを作用させたが、まったくオリゴ糖は切断されなかった。従って、生体内では、今までに精製されていない新しいグリコシダ-ゼにより代謝されている可能性が高い。次に大阪大学の楠本らと共同研究を行い、GlcーXyl,GlcーXylーXyl、SerーGlcーXyl、SerーGlcーXylーXylの合成に成功した。そこで、これらの糖鎖の外因系凝固反応におよぼす効果を調べた。リン脂質、Ca^<2+>、VII因子存在下、IXa因子によるX因子の活性化反応には、糖鎖はまったく影響しなかった。同様に、リン脂質、Ca^<2+>、組織因子存在下、VIIa因子によるX因子活性化反応に対しても糖鎖の影響は見られなかった。これらのことから、このオリゴ糖鎖が外因系凝固反応に直接関与している可能性が低いことが示された。しかし、グリコシダ-ゼによってVII因子、IX因子よりオリゴ糖を切断し、それらの機能解析をする必要がある。
以上の様に、種々のグリコシダ-ゼを用いて、タンパク質分子から糖鎖を取り除くことを試みたが、現在市販の酵素はまったく作用しなかった。そこで、GlcーXyl、GlcーXylーXylなどの糖鎖の化学合成を行い、外因系凝固反応に対する効果を調べた。その結果、これら糖鎖は外因系凝固反応には直接作用しないことが示唆された。しかし、この糖鎖が外因系凝固因子の代謝や生合成の制御に関与していることも考えられる。最近、業者を通してウサギ肝臓の入手が可能となったため、化学合成した糖鎖を利用して新しいグリコシダ-ゼおよび糖鎖の生合成に関与するグリコシルトランスフェラ-ゼの精製を進めたい。
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[Publications] Hitoshi Nishimura: "Evidence for the existence of Oーlinked sugar chains consisting of glucose and xylose in bovine thrombospondin." Journal of Biochemistry. (1992)
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[Publications] Hitoshi Nishimura: "Factor IX Fukuoka:Substitution of Asnー92 by His in the second epidermal growth factorーlike domain." Journal of Biological Chemistry.
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[Publications] Sumihiro Hase: "Structure of (Xyl)2GlcーOーSerー53 Found in the First Epidermal Growth Factorーlike Domain of Bovine Blood Clotting Factor IX." Journal of Biological Chemistry. 265. 1858-1861 (1990)
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[Publications] Hitoshi Nishimura: "Identification of a Disaccharide(XylーGlc)and a Trisaccharide(Xyl_2ーGlc)OーGlycosidically Linked to a Serine Residue in the First Epidermal Growth Factorーlike Domain of Human Factor IX,Factor VII,Protein Z and Bovine Protein Z." Journal of Biological Chemistry. 264. 20320-20325 (1989)
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[Publications] Sumihiro Hase: "A New Trisaccharide Sugar Chain Linked to a Serine Residue in Bovine Blood Coagulation Factors VII and IX." Journal of Biochemistry. 104. 867-868 (1988)
