損傷DNA結合特性を利用した修復遺伝子クローニング及び得られた遺伝子の機能の解析

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03808024
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 藤堂 剛 大阪大学, 医学部, 助手 (90163948)
• Keywords: 紫外線損傷 / DNA修復 / 光回復酵素 / ショウジョウバエ

Research Abstract

紫外線によるDNA損傷を認識している蛋白を同定する目的で、Glshift法により紫外線照射DNAに特異的に結合する因子の同定を試みたところ、ショウジョウバエ胚細胞中に2種の因子(因子1及び因子2)をみいだした。これらを分離・精製し、その酵素活性を決めたところ、両因子はいずれも光回復酵素活性を持っている事が解った。因子2は、ピリミジンダイマーを光回復し、従来大腸菌や酵母等でよく知られているphotolyaseのホモログである事が解った。因子1は(6-4)光産物を光回復する酵素である事を明らかにした。このような活性はかって同定されておらず、全く新らしいタイプの光回復酵素である。現在、これらの蛋白をコードしている遺伝子のクローニングを以下の3方法で行っている。
1.プラスミド発現ベクターを用いたcDNAライブラリーを作製し、大腸菌の光回復欠損を相補するcDNAクローンをスクリーニングする。
2.ファージ発現ベクターを用いたcDNAライブラリーを作製し、紫外線照射したDNAをプローブとして、紫外線照射DNAに特異的に結合するcDNAクローンをスクリーニングする。
3.精製蛋白のアミノ酸配列を決定し、それに基きオリゴヌクレオチドを合成し、cDNAライブラリーをスクリーニングする。
今後は、これらの因子のDNA修復系全体に中での役割をより明らかにする目的で、他のDNA修復に関与している蛋白との相互作用をみてゆきたい。

Research Products

• [Publications] T.Todo et al.: "Identification of cellular factors that recognize UV-damaged DNA in Drosophila melanogaster." Mutation Research. 273. 85-93 (1992)
• [Publications] H.Takemori et al.: "Characterization of cellular factors which bind specifically to Ultraviolet light irradiated DNA." Journal of Radiation Research. 33. 51- (1992)
• [Publications] T.Todo et al.: "A new photoreactivating enzyme that specifically repairs ultraviolet light-induced(6-4)photoproducts." Nature. 361. 371-374 (1993)