1992 Fiscal Year Annual Research Report
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03833035
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| Research Institution | National Institute for Physiological Sciences |
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Principal Investigator |
月田 早智子 岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助手 (00188517)
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| Keywords | 細胞接着 / カドヘリン / アドヘレンスジャンノション / ラディキシン / モエシン / エズリン / アクチンフィラメント / リン酸化 |
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| Research Abstract |
我々は、これまでカドヘリンが機能する接着部位であるAdherens Junction(以下AJ)に、c-yesおよびc-srcチロシンキナーゼが濃縮していることを示した。 カドヘリンを介した接着情報の伝達機構を明らかにするために、本年度は、以下の2点について研究を進めた。
(1)c-yes,c-srcキナーゼと結合している膜蛋白質の同定:
MDCK細胞を抗原に用いることにより、表面抗原に対するモノクローナル抗体ライブラリーを作成し、その中からc-yes抗体の免疫沈降物と反応するものをスクリーニングした。その結果、分子量6万程度のAJに局在している膜蛋白質を認識する抗体を得ることができ、それを用いてcDNAクローニングを開始した。
(2)c-yes、c-srcキーナーゼの基質となる細胞薄膜裏打ち蛋白質の同定:
この目的で、肝臓から単離したAJの裏打ち構造の分子構築をさらに詳細に検討した。 特に、エズリンと似ていることから、チロシンキナーゼのよい基質となると思われるラディキシンについてより詳細な解析を行った。ラディキシンは、AJの裏打ち構造に濃縮するアクチン結合蛋白質として我々が見い出したもので、昨年cDNAの単離に成功している。 本年度は、このラディキシンが直接結合する膜蛋白質の同定に力をいれた。 方法としては、BHK細胞の表面をビオチンでラベルし、抗ラディキシン抗体で免疫沈降する方法である。 その結果、分子量110KD膜蛋白質が共沈澱することが分かった。 今後、この蛋白質に特異的なモノクローナル抗体を単離し、その抗体を用いてcDNAをクローニングする予定である。 さらに、ラディキシンとこの膜蛋白質の結合が、チロシン燐酸化により、制御されるかどうかを調べていきたい。
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[Publications] Sato,N.: "A gene family consisting of ezrin,radixin,and moesin.Its specific localization at actin/plasma membrane association sites." Journal of Cell Science. 103. 131-143 (1992)
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[Publications] Matsuyoshi,N.: "Cadherin-medicated cell-cell adhesion is perturbed by v-src tyrosine phosphorylation in metastatic fibroblasts." Journal of Cell Biology. 118. 703-714 (1992)
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[Publications] Shimoyama,Y.: "Cadherin dysfunction in a human cancer cell line:Possible involvement of loss of αcatenin expression in reduced cell-cell adhesiveness." Cancer Research. 52. 5770-5774 (1992)
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[Publications] Tsukita,S.: "Molecular linkage between cadherin and actin filaments in cell-to-cell adherens junctions." Current Opinion in Cell Biology. 4. 834-839 (1992)
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[Publications] Yonemura,S.: "Concentration of an integral membrane protein,CD43(leukosialin,sialophorin),inthe cleavage furrow through the interaction of its cytoplasmic domain." Journal of Cell Biology.
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[Publications] Funatsu,T.: "Elastic filaments in situ in cardiac muscle:Deep-etch replica analysis in combination with selective removal of actin and myosin filaments." Journal of Cell Biology.
