1992 Fiscal Year Annual Research Report
生体膜に存在するアニオン輸送系,特に能動輸送系の解析
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04044123
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
大森 晋爾 岡山大学, 薬学部, 教授 (10032872)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
JUDITH A. Sh マックス, プランク生化学研究所・膜生化学部門, 研究員
FRIEDRICH Lo マックス, プランク生化学研究所・遺伝子センター, 教授
DIETER Oeste マックス, プランク生化学研究所・膜生化学部門, 教授
大塚 正人 岡山大学, 薬学部, 助手 (30243489)
池田 己喜子 岡山大学, 薬学部, 助教授 (20112154)
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| Keywords | カサノリ / Cl^-ATPase / sulfate permease / アニオン / 一次性能動輸送系 / 遺伝子クローニング |
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| Research Abstract |
1.Cl^-輸送性ATPase遺伝子のクローニング及び全一次構造決定
カサノリに存在するCl^--ATPaseの構成サブユニットであるa(54kDa)・b(50kDa)サブユニットの遺伝子のクローニングをPCR法を利用して試みた。aサブユニットについては,PCR法によるcDNAライブラリーのスクリーニング→プラークハイブリダイゼーションにより約800bpより成るクローンを得た。又,同一のクローンがtotalRNAを逆転写後PCRにより増幅した場合にも得られた。塩基配列決定を行った結果,蛋白質レベルで得たaサブユニットのN末端からのアミノ酸配列をコードしており,45アミノ酸残基まではCF_1-ATPaseのαサブユニットと高い相同性を示すが,それ以降の相同性は低いものであった。クローンの長さも短かく,偽遺伝子の可能性が示唆された。bサブユニットについては,totalRNAを逆転写後PCRによる増幅を行い,重複する3種類のクローンを得た。全体として1,427bpであり,bサブユニットをコードするORFをほぼ完全にカバーするものであった。このORFには,蛋白質レベルで得たアミノ酸配列が確認された。既存のカチオン輸送性ATPaseと比較するとFタイプATPase,βサブユニットに最も高い可能性を示した(N末端から120アミノ酸残基までは約70%,それ以降は90%以上)。
2.sulfate permease遺伝子のクローニング及び全一次構造決定
カサノリの硫酸イオン取り込み系と推定されるsulfate permeaseの構成サブユニット,CysA/CysT/CysW蛋白質及びsulfate binding protein(SBP)のクローニングを行った。cysAについては,シアノバクテリアCysA蛋白質と55%及び48%の相同性を示す2種類の遺伝子断片を得た。sbpについては,大腸菌・サルモネラ菌SBPと90%以上の相同性を示す遺伝子断片を得た。cysT/cysWは各2種類の候補クローンを得,塩基配列決定を進めている。
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[Publications] 池田 己喜子: "生体膜に存在するアニオン輸送系の解明-Cl^-輸送ATPaseに関する分子生物学的研究" (財)薬学研究奨励財団「薬学研究の進歩・研究成果報告集」. 7. 137-148 (1991)
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[Publications] Ikeda,M.,Satoh,S.,Maeshima,M.,Mukohata,Y.,&Moritani,C.: "A vacuolar ATPase and pyrophosphatase in Acetabularia acetabulum" Biochim. Biophys. Acta. 1070. 77-82 (1991)
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[Publications] Ohhashi,T.,Katsu,T.&Ikeda,M.: "Improvement of reconstitution of the Cl^--translocating ATPase isolated from Acetabularia acetabulum into liposomes and several anion pump characteristics" Biochim. Biophys. Acta. 1106. 165-170 (1992)
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[Publications] 池田 己喜子,大森 晋爾: "生体膜の存在するアニオン輸送系の研究-Cl^-輸送性ATPase及び硫酸イオン輸送系の解析" 日本学術振興会「学術月報」,. (1993)
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[Publications] Moritani,C.,Yamauchi,M.,de Groot,E.J.,Oesterhelt,D. & Ikeda,M.: "Acetabularia is equipped with sulfate permease:amplification of a 339 bp and a 552 bp fragment encoding a putative cysA and a sulfate binding protein" Planta,. (1993)
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[Publications] Moritani,C.,Ohhayashi,T.,Lottspeich,F.,Oesterhelt,D. & Ikeda,M.: "Cloning and sequencing of the gene encording the subunit of the Cl^--trnaslocating ATPase of Acetabularia acetabulum" Biochim.Biophys.Acta,. (1993)
