1992 Fiscal Year Annual Research Report

ユビキチンサイクルが支配するがん細胞の増殖と染色体不安定化

Research Project

Project/Area Number	04151062
Research Institution	National Institute of Genetics
Principal Investigator	瀬野悍二国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系 (30076989)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山尾文明国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 助教授 (10158074) 安田秀世金沢大学, 薬学部, 助教授 (40111554) 松本邦弘名古屋大学, 理学部, 教授 (70116375) 辻秀雄放射線医学総合研究所, 遺伝研究部, 主任研究官 (40163795) 鮎沢大東京大学, 応用微生物研究所, 助教授 (00142109)
Keywords	ユビキチン / 突然変異株 / マウス細胞 / 細胞周期 / 遺伝子構造 / 蛋白質リン酸化 / 染色体異常
Research Abstract	1.マウスFM3A細胞より分離したユビキチン活性化酵素E1温度感受性変異株の変異点の決定:マウスE1の完全長cDNAをクローン化し、全塩基配列を決定した。11株のE1変異株について変異点をRNA-PCRによって決定したところ、(イ)全てcoding領域、しかもヒト、マウス、コムギ、出芽酵母間で共通アミノ酸である部位が変わっていた。また、(ロ)変異点はE1蛋白質のC末端側半分の領域に集中していた。 2.変異E1とE2分子種との相互認識の変化の解析:S期進行に異常をもつE1変異株を用いてS期に必須な蛋白質のユビキチン化を仲介すると思われるE2分子種を、非許容温度におけるE1からE2への標識ユビキチンの転送反応の低下としてみつけた。そのクローン化が急がれる。 3.E1酵素のリン酸化による活性調節の検討:E1mRNA量は細胞周期で変動が見られなかった。一方、大腸菌で発現したマウスE1はcdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化され、活性は2倍以上に増加した。また、in vivoでE1のリン酸化を確認した。 4.サイクリンのユビキチン化と細胞周期との関係:大腸菌で発現され精製したヒトサイクリンBのユビキチン結合を精製したE1とE2を用いて検討したが、明瞭な結合を確認できなかった。このことは、サイクリンBがcdc2キナーゼと結合状態のときのみユビキチン化される可件性を示す。 5.姉妹染色分体交換(SCE)遺伝子の同定:CHO細胞から分離した高頻度SCE温度感受性変異株の変異を相補するヒト遺伝子をクローン化し構造決定したところ、RNAポリメラーゼIIのlargest subunitと同定された。その因果関係についての検討が急がれる。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Takahashi,E.-i.: "The human ubiquitin-activating enzyme E1 gene(UBE1)mapped to band Xp11.23-p11.3by fluorescence in site hybridization" Cytogenet.Cell Genet.59. 268-269 (1992)
[Publications] Ayusawa,D.: "Complementation by a cloned human ubiquitin-activating enzyme E1 of the S-phase-arrested mouse FM3A cell mutant with thermolabile E1" Cell Struct.Funct.17. 113-122 (1992)
[Publications] Imai,N.: "Cloning and sequence of a functionally active cDNA for mouse ubiqeitin-activating enzyme E1" Gene. 118. 279-282 (1992)
[Publications] Yamao,F.: "Conditional resistance to thymineless death predominatly select DNA synthesis deficient mutants in mammalian cells" Mutation Res.(1993)
[Publications] Yasuda,H.: "Cyclin dependent kinase (cdk2) in the murine cdc2 kinase ts mutant" Somat.Cell Mol.Genet.18. 403-408 (1992)
[Publications] Kusubata,M.: "p13^<suc1> suppresses the catalytic function of p34^<cdc2> kinase for intermediate filament proteins, in vitro" J.Biol.Chem.267. 20937-20942 (1992)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

ユビキチンサイクルが支配するがん細胞の増殖と染色体不安定化

Principal Investigator

瀬野 悍二 国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系 (30076989)

Research Products

[Publications] Takahashi,E.-i.: "The human ubiquitin-activating enzyme E1 gene(UBE1)mapped to band Xp11.23-p11.3by fluorescence in site hybridization" Cytogenet.Cell Genet.59. 268-269 (1992)

[Publications] Ayusawa,D.: "Complementation by a cloned human ubiquitin-activating enzyme E1 of the S-phase-arrested mouse FM3A cell mutant with thermolabile E1" Cell Struct.Funct.17. 113-122 (1992)

[Publications] Imai,N.: "Cloning and sequence of a functionally active cDNA for mouse ubiqeitin-activating enzyme E1" Gene. 118. 279-282 (1992)

[Publications] Yamao,F.: "Conditional resistance to thymineless death predominatly select DNA synthesis deficient mutants in mammalian cells" Mutation Res.(1993)

[Publications] Yasuda,H.: "Cyclin dependent kinase (cdk2) in the murine cdc2 kinase ts mutant" Somat.Cell Mol.Genet.18. 403-408 (1992)

[Publications] Kusubata,M.: "p13^<suc1> suppresses the catalytic function of p34^<cdc2> kinase for intermediate filament proteins, in vitro" J.Biol.Chem.267. 20937-20942 (1992)

瀬野悍二国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系 (30076989)