リンパ球増殖性疾患の悪性化におけるIL-6と癌遺伝子変異

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04152078
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 吉崎 和幸 大阪大学, 医学部, 助手 (90144485)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山西 弘一 大阪大学, 微生物研究所, 教授 (10029811)
• Keywords: リンパ球増殖性疾患 / Castleman's disease / IL-6 / bcl-2 / 抗bcl-2抗体

Research Abstract

1.Castleman's diseaseリンパ節細胞の細胞株の樹立
Castleman's disease(C.D.)患者の腫大リンパ節をin vitroで長期培養し株化に成功した。5種の細胞株を得てIL-6の発現をみたところ、2株にその上清中にIL-6を検出した。しかしいずれもIL-6を加えても増殖を示さなかった。
2.bcl-2蛋白に対するモノクローナル抗体の作製
C.D.患者リンパ節細胞の中にbcl-2癌遺伝子のt(14;18)translocationがみられ、しかも異なる転座様式が1患者で存在することを既に見出している。そこでbcl-2蛋白の発現を検索するため、bcl-2蛋白に対するモノクローナル抗体の作製を行った。
抗原に用いたbcl-2蛋白は、bcl-2α(26Kd)とbcl-2γ(24Kd)の混合でβ-Galとのfusion proteinである。なおこれらは本学バイオメディカル教育研究センターの辻本教授より供与された。当初15-20μgを半月毎に3回FCA,IFAと共に注入して作製したところ、全てaffinityの低いIgMクラスの抗体しか得られなかった。次に同量を約1〜2ケ月毎に免疫した結果、affinityの高いIgGクラスのモノクローナル抗体が得られた。2回のfusionにて29のクローンを得たがIgG_1は4,IgG_<2a>は12,IgG_<2b>は8個認めた。抗体判定はPOD結合wellにbcl-2抗原(100ng/ml,50μl)を付着させ細胞培養上清を加えよく混合した後、抗IgG抗体を反応させるElias法を用いた。更に特異性をみるため、bcl-2抗原を泳動後、培養上清によるWesternblot法を行った。結局4回の細胞融合を行い全部で273個の陽性クローン(IgM133,IgG136)を得たが樹立クローンは41個であった。
bcl-2に対する良い抗体はKorsmeyerらの抗体のみである。今回我々は抗体価の高いマウスモノクローナル抗体(IgGクラス)を得ることができた。これらを用いてbcl-2蛋白の発現機構が解析できると思われる。

Research Products

• [Publications] K.Yoshizaki,T.Kuritani,T.Kishimoto: "Interleukin-6 in autoimmune disorders" Seminats in Immunology. 4. 155-166 (1992)
• [Publications] H.Ohzato,K.Yoshizaki,N.Nishimoto,A.Ogata,etc.: "Interleukin 6 as a new indicator for the inflammatory status:Detection of serum levels of interleukin 6 and C-reactive protein following surgical poeration." Surgery. 111. 201-209 (1992)
• [Publications] A.Ogata,H.Tagoh,K.Yoshizaki,etc: "New highly sensitive immuroassay for cytokines by dissociation-enhanced lanthanide fluoro immunaassay(DELFIA)" J.Immunol.Method.148. 15-22 (1992)
• [Publications] H.Takemura,H.Suzuki,K.Yoshizaki,etc: "Anti-interleukin-6 autoantibodies in rheumatic disease-Significant increase of positive sera in patients with systemic sclerosis." Arthritis Rheum.(1993)
• [Publications] K.Yoshizaki,N.Nishimoto,K.Kondo,H.Tagoh,T.Kuritani.: "Role of interleukin 6 in pathogenesis of B lymphocytes-proliferative diseases." Role of Cytokines in Human Neoplastic Cell Growth,Gann Monograph on Cancer Research. 40. (1993)
• [Publications] K.Yoshizaki,T.kishimoto: "Interleukin 6" Epidermal Cytokines and Growth factors edited by T.Aluger and T.Schwarz. (1993)
• [Publications] 緒方 篤,吉崎 和幸: "免疫研究ハンドブック" 中外医学社(藤原大美:淀井淳司編), 433 (1992)
• [Publications] 吉崎 和幸: "サイトカインと疾患" 日本医学館(笠倉新平編), 190 (1992)