ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04253233
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 新川 詔夫 長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 孫田 信一 愛知県心障者コロニー, 発達障害研究所, 主任研究員 (00100165) ; 陣野 吉廣 長崎大学, 医学部, 講師 (20179097)
• Keywords: 多発性外骨腫症遺伝子 / ポジショナルクローニング / 転座切断点 / YACクローン / FISH

Research Abstract

本研究は特殊な症例〔t(8q;13q)を伴った多発性外骨腫症(EX)孤発例〕から逆行遺伝学的方法によりEX遺伝子を単離することを目的とした.本年度は以下の結果を得た.(1)8q23にマップされるコスミドクローンを用いたFISH解析により判明した7種のクローンの8q23領域中の配列順序はcen/cCI8-1185/cCI8-1148/cCI81435/cCI8553/cCI81512/cCI8-1122/cCI81173/telであった.このうち4クローンは8q上の切断点より近位に他の4種は遠位にマップされ、cCI8-553とcCI8-1512が切断点に最も近接していることが判明した.(2)cCI8-553とcCI8-1512を用いたPFGE解析により,患者のみに約950kbのextra bandを検出した.cCI8-1512で検出される断片は切断点から600kb以内であった.(3)cCI8-1512を基にYACライブラリーのスクリーニングを行い,yck8-90YACクローンを得た.yck8-90を用いた患者染色体によるFISHでは,正常の8番染色体の他に2つの転座派生染色体の切断点付近に蛍光シグナルを認めた.このことは切断点部位はyck8-90中に含まれていることを示す.(4)yck8-90のEcoRI消化のサブクローニングにより切断点をカバーする9種のサブクローンを得た.そのうち5′側の4.3kb断片を用いた通常のサザン解析で患者DNAにextra bandを検出した.即ち切断点はこの4.3kb中に含まれる.(5)4.3kb断片に対応するcDNAはまだ検出されていない.切断点自体が巨大なintron中にある可能性や、切断点近傍になにか重要な配列があるのかは今後の課題である。YACは完全に切断点をカバーしているので、このYACの解析を進める予定である。

Research Products

• [Publications] Yoshiura K,et al.: "Mapping of the bone marrow morphogenetic protein 1 gene(BMP1) to 8p21: Removal of BMP1 fromcandidacy for the bone disorder in Langer-Giedion svndrome." Cytogenet Cell Genet. 64. 208-209 (1993)
• [Publications] Yoshiura K, et al.: "Mapping of the 8q translocation breakpoint of t(8;13) observed in a patient with multiple exostoses." Genes Chrom Cancer. 9. 57-61 (1994)