1993 Fiscal Year Annual Research Report

小胞体経路の蛋白質選別輸送の分子機構

Research Project

Project/Area Number	04259106
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	大村恒雄九州大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80029933)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	姫野勝九州大学, 薬学部, 教授 (50037602) 中野明彦東京大学, 理学部, 助教授 (90142140) 田代裕関西医科大学, 学長 (40077558) 高野達哉帝京大学, 薬学部, 教授 (40124995) 池原征夫福岡大学, 医学部, 教授 (70037612)
Keywords	小胞体 / 蛋白質輸送 / エキソサイトーシス / エンドサイトーシス / ゴルジ装置 / 小胞輸送 / リソソーム
Research Abstract	小胞体経路の各オルガネラの形成機構とオルガネラ間の蛋白質の選別輸送機構を研究代表者と研究分担者で分担して研究を進め、下記の研究成果を得た。成果の大半は既に論文として学会誌などに発表している。 1.小胞体:小胞体膜蛋白質P-450について、小胞体に組み込まれたシグナルアンカー配列のアミノ末端が内腔側に存在することを証明し、シグナルアンカー配列に続くプロリンに富む配列が小胞体に組み込まれたP-450分子の高次構造形成に重要であることも確かめた(大村)。小胞体膜の蛋白質膜透過に関与する膜成分を透過中のペプチドとの化学架橋により検討し、9kDaの膜蛋白質を確認した(大村)。ミクロゾーム型アルデヒド脱水素酵素のC末端の疎水性アミノ酸配列が、この酵素の小胞体膜への挿入シグナルとしてだけでなく小胞体への留置シグナルとしても機能することを確かめた(田代)。P-450のシグナルアンカー配列の膜貫通領域が小胞体への留置シグナルとして機能することを確かめた(大村)。 2.小胞体-ゴルジ装置間輸送:この輸送過程に関与するSarlpによるGTPの加水分解は小胞体からの輸送小胞の形成以降に必要であることを無細胞輸送系を用いて確認した。 3.ゴルジ装置:プロ型前駆体蛋白質のプロセシングを行なう酵素Furinのゴルジ装置局在化シグナルを検討し、膜貫通領域よりC末端側の細胞質に露出したペプチド中にあることを見いだした(池原)。 4.リソソーム:ラット肝リソソームの膜蛋白質である酸性ホスファターゼのリソソーム局在化シグナルは細胞質に露出している短かなペプチド中のGYモチーフと考えられているが、酵母細胞で発現させた場合にはGYモチーフを改変しても膜貫通ドメインさえあれば液胞膜に運ばれることが確かめられた。動物細胞と酵母では局在化シグナルが異なるようである(姫野)。カテプシン群の内在性阻害蛋白質であるシスタチンalphaの細胞内転送にCキナーゼによるリン酸化が関与することを確かめた(勝沼)。 5.ペルオキシソーム:誘導剤投与で増殖した肝細胞内のペルオキシソームの膜と基質にユビキチンが高い濃度で存在することを免疫電顕法で確認し、余分なペルオキシソームの分解にはユビキチン系が関与する可能性がある(横田)。 6.トランスサイトーシス:培養上皮細胞にLDL受容体を導入しLDL受容体の細胞内輸送の実験系を確立した(高野)。

Research Products

(16 results)

All Other

All Publications (16 results)

[Publications] Naomi Hachiya: "A mitochondrial import factor purified from rat liver cytosol is an ATP-dependent conformational modulator for precursor proteins." EMBO J.12. 1579-1586 (1993)
[Publications] Tomoko Kuroiwa: "Detection of a novel 9-kDa endoplasmic reticulum membrane protein in mammalian cells by chemical cross-linking with translocating nascent peptides." J.Biochem.114. 541-546 (1993)
[Publications] Okura Shimozawa: "Core glycosylation of cytochrome P-450(arom)." J.Biol.Chem.268. 21399-21402 (1993)
[Publications] Soh Yamazaki: "Importance of the proline-rich region following signal-anchor sequence in the formation of correct conformation of microsomal cytochrome P-450s." J.Biochem.114. 652-657 (1993)
[Publications] S.Takahashi: "A mutation of furin causes the lack of the precursor-processing activity in human colon carcinoma LoVo cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1019-1026 (1993)
[Publications] Y.Suzuki: "Dietary regulation of rat intestinal angiotensin-converting enzyme and dipeptidyl peptidase IV." Am.J.Physiol.264. 1153-1159 (1993)
[Publications] T.Ohsita: "Analysis of lysosomal degradation isothiocyanate-labelled proteins by Toyo-pearl HW-40 affinity chromatography." J.Chromatography. 633. 281-286 (1993)
[Publications] Y.Matsunaga: "Participation of cathepsin B in processing of antigen preseintation to MHC class II." FEBS Lett.324. 325-330 (1993)
[Publications] T.Imanaka: "Immunological detection of F_1-ATPase gamma-subunit in rat liver peroxisomes." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1027-1034 (1993)
[Publications] N.Henomatsu: "Inhibition of intracellular transport of newly synthesized prolactin by bafilomycin Al in a pituitary tumor cell line,GH3 cells." Eur.J.Cell Biol.62. 127-139 (1993)
[Publications] T.Tagaya: "Correlation between phospholipase A_2 activity and intra-Golgi protein transport reconstituted in a cell-free system." FEBS Lett.324. 201-204 (1993)
[Publications] S.Koh: "Immunoelectron microscopic localization of the HPC-1 antigen in rat cerebellum." J.Neurocytology. 22. 995-1005 (1993)
[Publications] S.Nishikawa: "Identification of a gene required for membrane protein retention in the early secretory pathway." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 8197-8183 (1993)
[Publications] S.Kim: "Purification and characterization of flavine-adenine dinucleotide phosphohydrolase from rat liver lysosomal membranes." J.Biochem.114. 126-131 (1993)
[Publications] S.Yokota: "Formation of autophagosomes during degradation of excess peroxisomes induced by di-(2-ethylhexyl)phthalate treatment II.Immunocytochemical analysis of early and late autophagosomes." Eur.J.Cell Biol.62. 372-383 (1993)
[Publications] K.Nishiyama: "ATP-dependent degradation of a mutant serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase in a primary hyperoxaluria type l case." J.Cell Biol.123. 1237-1248 (1993)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

小胞体経路の蛋白質選別輸送の分子機構

Principal Investigator

大村 恒雄 九州大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80029933)

Research Products

[Publications] Naomi Hachiya: "A mitochondrial import factor purified from rat liver cytosol is an ATP-dependent conformational modulator for precursor proteins." EMBO J.12. 1579-1586 (1993)

[Publications] Tomoko Kuroiwa: "Detection of a novel 9-kDa endoplasmic reticulum membrane protein in mammalian cells by chemical cross-linking with translocating nascent peptides." J.Biochem.114. 541-546 (1993)

[Publications] Okura Shimozawa: "Core glycosylation of cytochrome P-450(arom)." J.Biol.Chem.268. 21399-21402 (1993)

[Publications] Soh Yamazaki: "Importance of the proline-rich region following signal-anchor sequence in the formation of correct conformation of microsomal cytochrome P-450s." J.Biochem.114. 652-657 (1993)

[Publications] S.Takahashi: "A mutation of furin causes the lack of the precursor-processing activity in human colon carcinoma LoVo cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1019-1026 (1993)

[Publications] Y.Suzuki: "Dietary regulation of rat intestinal angiotensin-converting enzyme and dipeptidyl peptidase IV." Am.J.Physiol.264. 1153-1159 (1993)

[Publications] T.Ohsita: "Analysis of lysosomal degradation isothiocyanate-labelled proteins by Toyo-pearl HW-40 affinity chromatography." J.Chromatography. 633. 281-286 (1993)

[Publications] Y.Matsunaga: "Participation of cathepsin B in processing of antigen preseintation to MHC class II." FEBS Lett.324. 325-330 (1993)

[Publications] T.Imanaka: "Immunological detection of F_1-ATPase gamma-subunit in rat liver peroxisomes." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1027-1034 (1993)

[Publications] N.Henomatsu: "Inhibition of intracellular transport of newly synthesized prolactin by bafilomycin Al in a pituitary tumor cell line,GH3 cells." Eur.J.Cell Biol.62. 127-139 (1993)

[Publications] T.Tagaya: "Correlation between phospholipase A_2 activity and intra-Golgi protein transport reconstituted in a cell-free system." FEBS Lett.324. 201-204 (1993)

[Publications] S.Koh: "Immunoelectron microscopic localization of the HPC-1 antigen in rat cerebellum." J.Neurocytology. 22. 995-1005 (1993)

[Publications] S.Nishikawa: "Identification of a gene required for membrane protein retention in the early secretory pathway." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 8197-8183 (1993)

[Publications] S.Kim: "Purification and characterization of flavine-adenine dinucleotide phosphohydrolase from rat liver lysosomal membranes." J.Biochem.114. 126-131 (1993)

[Publications] S.Yokota: "Formation of autophagosomes during degradation of excess peroxisomes induced by di-(2-ethylhexyl)phthalate treatment II.Immunocytochemical analysis of early and late autophagosomes." Eur.J.Cell Biol.62. 372-383 (1993)

[Publications] K.Nishiyama: "ATP-dependent degradation of a mutant serine:pyruvate/alanine:glyoxylate aminotransferase in a primary hyperoxaluria type l case." J.Cell Biol.123. 1237-1248 (1993)

大村恒雄九州大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80029933)