強力なカフェイン感受性チャンネル開口薬MBEDを用いたCa遊離チャンネルの研究

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04263203
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 大泉 康 東北大学, 薬学部, 教授 (00006355)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松岡 節 東北大学, 薬学部, 教務職員 (40238986) ; 古川 賢一 東北大学, 薬学部, 助手 (20165468)
• Keywords: カルシウム / チャンネル / カフェイン / トキシン / 蛋白質精製 / モノクローナル抗体 / 血管平滑筋 / 中枢神経

Research Abstract

今回、MBED結合蛋白質に特異的に反応するモノクローナル抗体の作成を試み、更に中枢においても見いだされたMBED結合部位に生化学的性質について報告する。可溶化したウシ大動脈平滑筋ミクロソーム画分をイオン交換カラムクロマトグラフィー(Q-Sepharose HP)に付した。カラムから2つの^3H-MBED結合活性に主ピークが溶出された。この二つのピークには67kDaと58kDaの蛋白バンドが各々含まれていた。これらの蛋白バンドはこれまでの精製の過程で^3H-MBED結合活性と挙動を共にしており、活性に関与すると考えられる。また分子量などを考慮すると、リアノジン結合蛋白質とは明らかに異なる蛋白質であった。この二つのピークを各々抗原としてモノクローナル抗体の作成を行ない、ELISA、イムノブロットでスクリーニングし、既に4クローンを樹立した。現在これらの抗体を用いて^3H-MBED結合活性の免疫沈降、 ^3H-MBED結合蛋白質の同定並びに抗体カラムによる^3H-MBED結合蛋白質の精製を検討中であり、MBED結合蛋白質の精製が効率よく進展すると期待される。
中枢神経でも細胞内Ca^<2+>貯蔵部位のCa^<2+>遊離が細胞内情報伝達機構において重要な位置を占めている。また、Ca^<2+>遊離剤のカフェインは重要な中枢興奮薬でもあるが、その作用部位に関する分子レベルの研究は全く進展していない。そこで中枢神経においても^3H-MBED結合活性について検討した結果、モルモット大脳ミクロソーム画分には骨格筋、平滑筋とほぼ同等の結合活性が見られた。この結合蛋白質は、その結合活性の精製段階での挙動からして、リアノジンやIP_3各結合蛋白質とは明らかに異なり、また平滑筋のMBED結合蛋白質とも異なる点が多く見られたので、これらはアイソプロテインに可能性が考えられる。現在その結合蛋白質の精製を進めている。

Research Products

• [Publications] Akiko Watanabe: "Ca^<2+> dependent aggregation of rabbit platelets induced by maitotoxin,a potent marine toxin isolated from dinoflagellata." British Journal of Pharmacology. (1993)
• [Publications] Anas Subarnas: "A possible mechanism of antidepressant activity of beta-amyrin palmitate isolated from Lobelia inflata leaves in the forced swimming test." Life Science. 52. 289-296 (1993)
• [Publications] Anas Subarnas: "An antidepressant principle of Lobelia inflata L." Journal of Pharmacological Science.81. 620-621 (1993)
• [Publications] Yuko Tawada-Iwata: "Altered agonist-induced Ca^<2+> mobilization in aortic smooth musclc cells from cardiomyopathic hamsters." Americal Journal of Physiology. 263. H68-H74 (1992)