1992 Fiscal Year Annual Research Report
抗HIV活性をもつ機能性アンチセンスDNAの合成とその作用機序
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04269108
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| Research Institution | Chiba Institute of Technology |
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Principal Investigator |
高久 洋 千葉工業大学, 工学部, 教授 (50101267)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 秀喜 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (20192669)
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| Keywords | アンチセンスDNA / 抗HIV剤 / HIVmRNA / ホスホロチオエートオリゴマー / リピドーDNA / エイズ |
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| Research Abstract |
当該年度予定の抗HIV剤としての機能性アンチセンスDNAの構築を検討したところ、アンチセンスDNAの5'ー末端に脂溶性リピド.1,2ーヘキサデシルグリセロースホスフェートを導入したリピドーDNAオリゴマーの合成に成功した。また、細胞内における分解酵素に抵抗させるためにホスホロチオエート結合をもつDNAオリゴマーの構築も遂行したところ、目的生成物が得られた。
そこで上述で得られたDNAオリゴマーの抗HIV活性を検討したところ、当初、細胞内に最も良く取り込まれると思われたリピドーDNAオリゴマーが、0.02μMと低い濃度では高い活性が見られたが、0.5μM濃度では細胞毒性が現われ、抗HIV活性は完全に示さないことがわかった。すなわち、リピドーDNAオリゴマーは高濃度では細胞膜透過性を向上させることはなく、細胞膜を逆に包み込み、細胞を殺すといったような働きをすることが明らかとなった。
一方、アンチセンスDNAの効力を発揮させる一つに、HIVmRNA上での塩基配列の選択が重要課題となる。そこで、貴伝子発現制御するtat,逆転写酵素産生のpol,増殖調節遺伝子のrev,さらにはtatタンパク質が結合するTARRNAを選び、そのシーケンス依存性を検討した。その結果、revのスプライシングアセプター部位が最も効果的なシーケンスであることがわかった。また、期待したTARRNAへのアンチセンスDNAの効果は低いことから、二重鎖RNAへのDNAの結合は非常に弱いと思われる。これらの結果からシーケンス依存性があることがわかった。以上、我々はアンチセンスDNAが抗HIV剤として利用できる可能性を見い出した。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kim,S.-G.4名: "Anti-HIV activities and physicochemical properties of phosphorothioate analogues complementary to HIV sequences." Bioorg.Med.Chem.Letters. (1993)
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[Publications] Nagai,K.7名: "Characterrizations and biological activity of 8-substituted analogues of 2',5-oligoadenylates." Biochim.Biophys.Acta.(1993)
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[Publications] Kim,S.-G.4名: "The influence of oligodeoxyribonucleotide phosphorothioate pyrimidine strands in triplex formation." FEBS Letters. 314. 29-32 (1993)
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[Publications] Yamamoto,N.18名: "Mechanism of anti-HIV activity of polyoxometalates,a class of broad-spectrum antiviral agents." Molecular Pharmacol.
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[Publications] Nakashima,H.7名: "Anti-human immunodeficiency virus activity of a novel synthetic peptide,T22([Tyr-5,12,Lys-7]polyphemusin II):a possible inhibitor of virus-cell fusion." Antimicrob.Agents Chemother. 36. 1249-1255 (1992)
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[Publications] Nakashima,H.8名: "Inhibition of human immunodeficiency viral replication by tannins and related compounds." Antiviral Res.18. 91-103 (1992)
