ネガティブ鎖RNAウイルスの遺伝子複製調節と粒子形成機序

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04271206
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 田代 真人 自治医科大学, 医学部, 助教授 (90111343)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小田切 孝人 自治医科大学, 医学部, 講師 (80177237)
• Keywords: インフルエンザウイルス / 非構成NS2蛋白 / RNA合成 / 干渉性欠損(DI)RNA / センダイウイルス(HVJ) / ウイルス出芽極性 / 細胞内蛋白輸送

Research Abstract

A型インフルエンザウイルスのRNA複製過程におけるNS2蛋白の機能。
野生株または変異NS2をもつWa-182株をMDCK細胞に感染させ、合成されるPA遺伝子及びPA由来DI-RNAのcRNA,vRNA,mRNAをリボヌクレアーゼプロテクション法で経時的に定量したところ、変異株に於けるPAcRNAの合成は、感染初期には野生株よりも高かったが、DI-cRNAの合成が始まると完全に抑制された。これに対し、DI-cRNA合成は感染後期まで続き、最終合成量はPA-cRNAの2倍を越えた。一方、野生株でもPA由来のDI-cRNAが検出されたが、その合成量は極めて少なく、変異株における選択的合成促進は見られなかった。以上より、変異株におけるPA遺伝子の複製抑性は、DI-cRNAの増幅と逆相関して、cRNA合成過程で起こっていることが明らかにされた。
2.センダイウイルス糖蛋白輸送極性シグナルの解析。
(1)HVJ野生株とF1-R変異株(側基底領域からも出芽)の各F,HN,M遺伝子クローンを、ワクチニアベクターを用いて極性化MDCK細胞で発現させ、各蛋白の発現領域を膜蛍光抗体法と免疫電顕で調べたところ、単独で発現させた糖蛋白は何れも尖頂方向へ直接輸送された。変異M蛋白は野生株と同様に細胞質に広く分布していたが、会合傾向が見られた。更に、細胞質中のM蛋白は、transGolgiより上流に於て、既に糖蛋白の細胞質領域と結合しており、両者は一緒に細胞膜へと輸送されることが示唆された。
(2)colchicineやnocadazolでMDCK細胞の微小管を脱重合させると、野生株の出芽極性および膜蛋白の細胞内輸送極性がF1-R株と同様に両極性に変化した。また微小管構造を蛍光抗体法で観察すると、野生株感染細胞では変化がないが、F1-R感染細胞ではゴルジ装置周辺の微小管構造に乱れが認められた。

Research Products

• [Publications] M.Tashiro,J.T.Seto,S.Choosakul,M.Yamakawa,H.-D.Klenk,R.Rott: "Budding site of Sendai virus in polarized epithelial cells is one of the determinants for tropesm and pathogenicity in mice." Virology.187. 413-422 (1992)
• [Publications] M.Tashiro,J.T.Seto,S.Choosakul,H.Hegemann,H.-D.Klenk,R.Rott.: "Changes in specific cleavability of the Sendai virus F protein:implications for pathogenicity in mice." J.Gen.Virol.73. 1575-1579 (1992)
• [Publications] M.Tashiro.M.Yamakawa,K.Tobita,J.T.Seto,H.-D.Klenk,R.Rott.: "Significance of basolateral domain of polarized MDCK cells for Sendai virus-induced cell fusion." Arch.Virol.125. 129-139 (1992)
• [Publications] M.Tashiro,Y.Yokogoshi,K.Tobita,J.T.Seto,R.Rott,H.Kido: "Tryptase Clara,an activating protease for Sendai virus in rat lungs,is involved in pneumopathogenicity." J.Virol.66. 7211-7216 (1992)
• [Publications] H.Kido,Y.Yokogoshi,K.Sakai,M.Tashiro,Y.Kishino,A.Fukutomi,N.Katunuma: "Isolation and characterization of a novel trypsinlike protease found in rat bronchiolar epithelial clara cells:a possible activator of the viral fusion glycoprotein." J.Biol.Chem.267. 13573-13579 (1992)
• [Publications] H.Scheiblauer,M.Reinacher,M.Tashiro,R.Rott.: "Interactions between bacteria and influenza A virus in the development of influenza pneumonia." J.Infect.Dis.166. 783-791 (1992)
• [Publications] M.Homma,M.Tashiro.: "Parainfluenza 1 virus(Sendai virus of mice).R.G.webster,A.GranoFF(eds);Encyclopedia of Virology" Saunders Scientific publications,London(in press)., (1993)
• [Publications] 田代 真人: "瀬野 悍二,小山 秀機,黒木 登志夫(編)動物培養細胞マニュアル" 共立出版, (1993)