1992 Fiscal Year Annual Research Report
渦鞭毛藻における麻痺性貝毒生合成遺伝子の解析とその防除に関する分子生態学的研究
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04404014
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
石田 祐三郎 京都大学, 農学部, 教授 (20026488)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山口 峰生 水産庁南西海区水産研究所, 赤潮環境部, 主任研究官
古澤 巌 京都大学, 農学部, 教授 (10026594)
吉永 郁生 京都大学, 農学部, 助手 (40230776)
左子 芳彦 京都大学, 農学部, 講師 (60153970)
内田 有恆 京都大学, 農学部, 助教授 (50027190)
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| Keywords | 麻痺性貝毒 / Alexandrium属 / 粗酵素液 / GTX欠損突然変異株 / DNA抽出法 / メンデルの法則 |
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| Research Abstract |
本研究は渦鞭毛藻Alexandriumの生産する麻痺性貝毒の生合成に関わる遺伝子を解明し,貝毒の防止のための方策を立てることを目的として行なう。本年度の研究実績の概要は下記の通りである。
1)雌雄異株であるAlexandrium tamarenseおよびA.catenellaからそれぞれ雑種第1代(F1)を得て,麻痺性貝毒の成分組成(STXnやGTXn)を表現型形質として親株のそれと比較し貝毒伝達がメンデルの法則によることを明らかにし,本貝毒の生合成に関与する系が染色体にあることをつきとめた。
2)A.catenellaおよびA.tamarenseの代表株の大量培養を行ない,細胞を破砕後粗酵素液を作り,STXを基質として反応させ,その反応産物をHPLC蛍光分析にて測定した。その結果,A.tamarense151株の粗酵素系の反応でSTXからGTX5が検出された。このほか未同定のピークが検出された。この粗酵素液は脂質(渦鞭毛藻特有)などがHPLCを妨害することから粗酵素液の前処理の検討を種々行ない,アセトン粉末および透析一硫安分画のいずれも一長一短であり,さらに検討が必要となった。
3)A.catenellaおよびA.tamarenseの大量培養を行なって藻体を集め,核DNAの分離・精製を行なった。渦鞭毛藻のDNA抽出は他の真核生物や原核生物と異なり,抽出の際,多糖,脂質の除去が困難で,試行錯誤を重ねた末に確立された。
4)A.catenellaおよびA.tamarenseからSTXやGTX欠損突然変異株を作成するために,紫外線照射,エチレンブロマイド,5-ブロモウシシル,ニトロリグアニジンを使用した。その結果,紫外線照射によって親株の麻痺性貝毒の成分組成と異なる突然変異株1株を得たが,今後,多くの分離を必要とする。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] 左子 芳彦,金 昌勲,石田 祐三郎: "麻痺性貝毒の起源-海産渦鞭毛藻Alexandrium属" 化学と生物. 30. 726-734 (1992)
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[Publications] M.Adachi,Y.Sako,and Y.Ishida: "The identification of conspecific dinoflagellates Alexandrium tamarense from Japan and Thailand by Monoclonal Antibodies" Nippon Suisan Gakkaishi. 59. 327-332 (1993)
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[Publications] I.Yoshinaga and Y.Ishida: "Strategy of oligotrophic growth of pelagic marine bacteria" Arch,Hydrobiol.Beih.37. 95-100 (1992)
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[Publications] A.Mitsutani,K.Takesue,M.Kirita and Y.Ishida: "Lysis of Skeletonema costatum by Cytophaga sp.isolated from the coastal water of the Ariake Sea" Nippon Suisan Gakkaishi. 58. 2159-2167 (1992)
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[Publications] Y.Sako,C.H.Kim and Y.Ishida: "Mendelian inheritance of paralytic shellfish poisoning toxin in the marine dinoflagellate Alexadnrium catenella" Biosci.Biotech.Biochem.56. 692-694 (1992)
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[Publications] S.Sawayama,Y.Sako and Y.Ishida: "New inhibitor for mating reaction of Alexadnrium catenella produced by marine Alteromomas sp." Nippon Suisan Gakkaishi. 59. 291-294 (1993)
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[Publications] 左子 芳彦,足立 真佐雄,石田 祐三郎: "微生物の生態18-微生物生態学の新たな展開と手法アイソザイム,モノクローナル抗体法による微細藻の識別" 学会出版センター, 151 (1992)
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[Publications] Y.Ishida,C.H.Kim,Y.Sako,N.Hirooka,and A.Uchida: "Toxic Phytoplankton Blooms in the Sea.PSP toxin production is chromosome dependent in Alexandrium spp." Elsevier Science Publishers, 952 (1993)
