1993 Fiscal Year Annual Research Report
Cyclic GMP/G-kinaseによるリン酸化の基質となるタンパク質の同定
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04454148
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
今井 昭一 新潟大学, 医学部, 教授 (60013869)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 豊 新潟大学, 医学部, 講師 (40182795)
仲澤 幹雄 新潟大学, 医学部, 助教授 (80143759)
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| Keywords | cGMP / G-kinase / ブタ大動脈平滑筋 / Calmodulin / 240kDaタンパク / Heparin / IP_4 / IP_3受容体 / Concanavalin A |
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| Research Abstract |
cGMP依存性タンパクリン酸化酵素(G-kinase)の基質であり、そのリン酸化とG-kinaseによる細胞膜Ca^<2+>-pumpの活性化との間に良い相関が認められるタンパクとしてブタ大動脈平滑筋から我々が見つけだした、分子量240kDaのタンパクは、その後の研究で、calmodulin、concanavalin A、heparinに結合性を持つ事がわかり、Triton X-100で可溶化後、3段階(calmodulin、concanavalin A、heparin)のaffinity chromatographyにより、SDS-PAGE上、殆ど単一のバンドと見られるレベルまで精製できる様になったので、予備的なアミノ酸分析を行った所、同じくheparin結合性で、分子量も良く似た糖タンパクであるラット及びマウス小脳のinositol 1,4,5-trisphosphate(IP_3)受容体と、21個のアミノ酸配列が完全に一致する断片を含む事がわかった。そこで、IP_3結合性について検討を行った所、IP_3を単一部位に高い親和性で結合する事(IP_4の親和性は、IP_3の約1/60)、結合の比活性は精製につれ上昇する事、結合はIP_3受容体の拮抗薬であるheparinで完全に抑制される事、等が明かとなった。蔗糖密度勾配遠心分離で、IP_3結合活性は、240kDaタンパクと常に行動を共にしており、240kDaタンパク自身の性質である事は間違いない。又、240kDaタンパクの沈降位置は、小脳から精製したIP_3受容体のそれとほぼ同じであるし、240kDa蛋白質に比べると明らかに弱いが、小脳IP_3受容体もG-kinaseによってリン酸化されるので、240kDaタンパクは、IP_3受容体ファミリーの一員であると考えられる。今後は、チャネル活性の証明、G-kinaseによる細胞膜Ca^<2+>-pumpの活性化に、240kDaタンパク以外のタンパクが必要か否かについて検討をしたい。240kDaタンパクと小脳のIP_3受容体とは、calmodulin結合性に違いのある事がわかっているが(小脳IP_3受容体はcalmodulin非結合性)、予備的検討で、免疫学的にも多少違いのある事が示唆されている。その点についても更に検討したい。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] D.-L.Luo,M.Nakazawa,T.Ishibashi,K.Kato,S.Imai: "Putative,selective inhititors of sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-pump ATPase inhibit relaxation by nitroglycerin and atrial natriuretic factor of the rabbit aorta contracted by phenylephrine" The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 265. 1187-1192 (1993)
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[Publications] T.Ishibashi,M.Hamaguchi,K.Kato,T.Kawada,H.Ohta,H.Sasage,S.Imai: "Relationship between myoglobin contens and increases in cyclic GMP produced by glyceryl trinitrate and nitric oxide in rabbit aorta,right atrium and papillary muscle" Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 347. 553-561 (1993)
