トランスジェニックマウスを用いた抗体の体細胞突然変異機構の研究

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454211
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 東 隆親 名古屋市立大学, 医学部, 助教授 (00028234)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡田 秀親 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (30160683)
• Keywords: 体細胞突然変異 / 抗体 / トランスジェニック

Research Abstract

体細胞突然変異は抗体遺伝子の可変領域に高頻度に発現し、免疫の過程で抗体の抗原に対するアフィニティの増大と密接に関連し、免疫の記憶とも関係があると考えられている。体細胞突然変異をin vitroの培養系で誘導することは困難なので、in vivoでの研究に頼らざるを得ない。これまでの研究から体細胞突然変異は、再構成した抗体遺伝子の可変領域に高頻度に発現することが知られているが、発現のシグナルが再構成したV-(D)-J遺伝子にあるのか、あるいは、再構成によって接近したプロモーターとエンハンサー等の制御因子にあるのかは不明であり、本研究はこの点を明らかにすることを目的とした。
抗体H鎖由来のプロモーターとイントロエンハンサーによって発現が制御されるクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子を、マウス授精卵に注入してトランスジェニックマウスを作成した。CAT遺伝子は抗体遺伝子と同様に骨髄細胞および脾臓に発現したが胸腺には発現を認めなかった。このマウスを胸腺依存性抗原(NP-CGG)で頻回免疫して抗NP抗体を産生するハイブリドーマを作成した。在来の抗体遺伝子に体細胞突然変異が発現していることを確認した後、CAT遺伝子に体細胞突然変異が発現しているかどうかを調べた。その結果11のハイブリドーマのうち3つに合計6つの塩基置換を認めた。このことより抗体以外の遺伝子でも抗体のプロモーターとエンハンサーによって発現が制御されると体細胞突然変異が発現することが明らかとなり、この突然変異発現のシグナルは、再構成によって接近したプロモーターとエンハンサーにあることがわかった。

Research Products

• [Publications] TAKACHIKA AZUMA,Noboru MOTOYAMA,LARRY E.FIELDS,DENNIS Y.LOH: "Mutation of the chloramphenicol acetyl transferase transgene driven by the immunoglobulin promoter and intron enhancer." International Immunology. 5. 121-130 (1993)