高親和性IgEレセプター(FcepsilonRI)を介したシグナル伝達機構の解析

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454212
• Research Institution: Juntendo University School of Medicine
• Principal Investigator: 羅 智靖 順天堂大学, 医学部, 講師 (60230851)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 廣瀬 智弘 山之内製薬, 中央研究所, 研究員
• Keywords: FcepsilonRI / シグナル伝達 / マスト細胞 / キメラ融合分子 / Sykキナーゼ

Research Abstract

高親和性IgEレセプター(FcepsilonRI)は、マスト細胞、好塩基球、好酸球、皮膚のランゲルハウス細胞などに選択的に発現しているレセプターで、I型アレルギー反応の効果相を発動させる分子である。FcepsilonRIはalpha_1beta_1gamma_2の4量体構造をとっており、alpha鎖はIgEを結合し、beta、gamma鎖はシグナル伝達に関与する。遺伝子組み換えによってヒトFcepsilonRIalpha鎖細胞外ドメインの可溶化(CHO細胞)が可能になったが、IgEとFcepsilonRIalpha鎖の高親和性結合の分子機構を明らかにするためには、alpha鎖上のIgE結合部位の高次構造を解明する必要があり、alpha鎖の結晶化を目指して可溶化alpha鎖大量生産系をバキュロウイルスを用いて構築した。結晶化のためには糖鎖修飾を除く必要があるので、その前段階として糖鎖修飾部位を同定し、各部位の糖鎖修飾の程度を明らかにした。今後、主たる糖鎖修飾部位に変異を導入して、糖鎖修飾を除き、IgE結合活性を検討する。
より単純な一分子の系を用いてシグナル伝達を解析するために、IgEを結合するヒトalpha鎖細胞外ドメインと、シグナル伝達に関与するヒトbeta鎖C末端側の細胞内ドメインまたはヒトgamma鎖の細胞内ドメインとのキメラ融合分子を導入した細胞株を樹立し、その発現様式を明らかにした。またヒト好塩基球細胞株よりヒトSykキナーゼ遺伝子をクローニングし、上記の細胞株に導入して、FcepsilonRIを介するシグナル伝達におけるSykキナーゼの役割を検討している。

Research Products

• [Publications] Ra,C.,Kuromitsu,S.,Hirose,T.,Yasuda,S.,Furuichi,K.,Okumura,K.: "Soluble human high-affinity receptor for IgE abrogates the IgE-mediated allergic reaction." Int.Immunol.5. 47-54 (1993)
• [Publications] Sandford,A.,Shirakawa,T.,Moffat,M.,Danjels,S.,Ra,C.,: "Localisation of atopy and the beta subnit of high-affinity IgE receptor (FcepsilonRI)on chromosome llq." The lancet. 341. 332-334 (1993)
• [Publications] Ohno,H.,Aoe,T.,Ra,C.,Yamamoto,T.,Saito,T: "TCR isoform containing the Fc receptor gamma chain exhibits structural and functional differences from isoform containing CD3zeta." Int.Immunol.5. 1403-1411 (1993)
• [Publications] Yagi,S.,Yanagida,M.,Tanida,I.,Okumura,K.,Ra,C.,et al.: "High-level expression of the truncated alpha chain of FcepsilonRI as a soluble from by baculovirus infected insect cells:Biochemical characterization of the recombinant product." Eur.J.Biochem.(in press).
• [Publications] Yagi,S.,Suzuki.K.,Hasegawa,A.,Okumura,K.,Ra,C.: "Cloning of the cDNA for the dclctcd Syk kinase homologous to Zap-70 from human basophilic leukemia cell line(KU 812)." Biochem.Biophys.Res.Commu.(in press).
• [Publications] Shirakawa,T.,Li,A.,Dubowitz,M.K.,Dekker,J.W,Shaw,A.,Faux,J.A.,Ra,C.,et al.: "Variants of the beta subunit of the high affinity IgE receptor and atopy." Nature.Genetics.(in press).
• [Publications] 富岡,玖夫 羅,智靖: "医科学出版社" マスト細胞とアレルギー:Mast cell revisited. 244 (1993)
• [Publications] 平野,俊夫編: "羊土社" 免疫のしくみと疾患. 166 (1992)