1992 Fiscal Year Annual Research Report
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04454266
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
横山 光宏 神戸大学, 医学部, 教授 (40135794)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
末松 正邦 神戸大学, 医学部附属病院, 助手 (90240853)
川嶋 成乃亮 神戸大学, 医学部, 助手 (10177678)
川原 康洋 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (80169755)
石川 雄一 神戸大学, 医学部, 助教授 (90159707)
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| Keywords | 血管内皮細胞 / 内皮由来血管弛緩因子 / 低比重リポ蛋白質 / 高比重リポ蛋白質 / NO合成酵素 / プロテインキナーゼC / リゾホスファチジルコリン / 細胞内Ca^<2+>濃度 |
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| Research Abstract |
1. EDRFの産生及び放出に対するリゾリン脂質及び修飾リポ蛋和質の影響 ー 我々は、動脈硬化の一因とされる酸化LDL,および酸化の過程で増加したリゾホスファチジルコリン(LPC)が、EDRFを介する血管拡張反応を抑制することを見出した。さらに酸化LDL、およびLPCはともに、ウシ大動脈培養内皮細胞において、受容体刺激によるPI代謝回転、並びに細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を濃度依存性に抑制した。この受容体を介する情報伝達機構を抑制することが酸化LDLおよびLPCによるEDRFの産生抑制の機序の一つであることを明らかにした。また、酸化LDL並びにLPCによるEDRF産生の抑制は高比重リポ蛋白質(HDL)により減弱することを見出した。HDLは酸化LDL中のLPCの内皮細胞への移行を減少させること、さらに移行したLPCを引き抜くことにより、その作用を示すことを明らかにした。
2. 内皮細胞NO合成酵素(NOS)の精製とその活性調節機構 ー ウシ大動脈培養内皮細胞(BAEC)より、NOSを単離、精製した。BAECのconstitutiveNOSは膜画分に存在し、その分子量はSDS-PAGE上で、13,500であった。その活性はCa^<2+>/カルモジュリンによって調節されており、co-factorとしてNADPH,FAD,BH_4が必要であった。現在試験管内で、細胞膜に存在するリン脂質による活性調節について検討中である。さらにBAECを用いて細胞レベルにおけるNOの産生調節機構を調べた。NO産生量は化学発光法を用いて測定した。Protein kinase C (PKC)の活性化物質であるTPAは濃度依存性に受容体刺激によるNO産生のみならず、A23187によるNO産生をも抑制した。一方、dibutylic cyclic AMP及び、8-bromocyclic GMPはNO産生に影響を与えなかった。これらの結果から、内皮細胞におけるNO産生は細胞内Ca^+濃度やPKCなどのセカンドメッセンジャーによって制御されていることが明かとなった。
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[Publications] Y.matsuda: "High density lipoprotein reveses inhibitory effect of oxidized low density lipoprotein on endothelium-dependent arterial relaxation." Circ Res. (1993)
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[Publications] M.Koide: "Cytokine-induced expression of an inducible-type of niric oxide synthase gene in cultured vascular smooth muscle cells." FEBS Letters. (1993)
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[Publications] N.Inoue: "Lysophosphatidylcholine inhibits bradykinin-induced phosphoinositide hydrolysis and calcium transients in cultured bovine aortic endothelial cells." Circ Res. 71. 1410-1421 (1992)
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[Publications] K.Hirata: "Impaired vasodilatory response to atrial natriuretic peptide during atherosclerosis progression." Arteriosclerosis and Thrombosis. 12. 99-105 (1992)
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[Publications] T.Tsuda: "Angiotensin 2 Stimulates two myelin basic protein/microtubule-associated Protein 2 Kinases in culutured vascular smooth muscle cells." Circ Res. 71. 620-630 (1992)
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[Publications] M.Koide: "Endothelin-1 stimulates tyrosine phosphorylation and the activities of two mitogen-activated protein kinases in cultured vascular smooth muscle cells." J Hypertension. 10. 1173-1182 (1992)
