血管緊張亢進の成因と新しい血管拡張薬の開発に関する分子細胞生物学的研究

1994 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 04454268
• Research Institution: KYUSHU UNIVERSITY
• Principal Investigator: 金出 英夫 九州大学, 医学部, 教授 (80038851)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西村 淳二 九州大学, 医学部, 講師 (90237727) ; 小林 誠 九州大学, 医学部, 助教授 (80225515)
• Keywords: 血管平滑筋 / 細胞カルシウム / 血管緊張 / 血管拡張

Research Abstract

ラット大動脈初代培養平滑筋細胞のAT IItype-1受容体mRNAの発現におよぼすATIIおよびcAMPの効果を、逆転写ポリメラーゼ・チェイン・リアクション(RT-PCR)法を用いて検討した。一方、フラ-2顕微鏡測光法を用いて(Ca)iを測定し、この生理的反応性とATII受容体mANAレベルとの関係を検討した。ATIIの添加によりATII受容体mRNAレベルは時間および用量依存性に減少した。最大効果(対照の50±13%に減少)はATIIの添加後6時間で現れ、24時間後もとのレベルに復した。比較的選択的なC-キナーゼの阻害剤であるH-7(30μM)の添加によって、このATIIにより惹起される6時間後のATII受容体mRNAの減少は阻止された。またC-キナーゼの刺激剤であるphorbol 12myristate 13-acetate 0.3μMの添加により同様のATII受容体mRNAレベルの減少(対照の35±8%に減少)が見られた。一方、10μM forskolinと10μM 3-isobuty-1-methyl-xanthine(IBMX)によって細胞内のcAMPを増加させると、ATII受容体mRNAレベルは6時間後に対照の50±13%に減少し、24時間後に対照の219±39%に増加した。ATII受容体mRNAの減少およびcAMPにより惹起されるATII受容体mRNAの増加に伴い、ATIIにより引き起こされる(Ca)i上昇反応もそれぞれ減少あるいは増大した。一方、H-7はATIIによるATII受容体mRNAの減少を防止したにもかかわらず、ATIIにより引き起こされる(Ca)iの反応性の減弱は防止しなかった。またforskolinとIBMXの添加6時間後、ATII受容体mRNAは減少したが、ATIIにより引き起こされる(Ca)i上昇反応の第一相は減少しなかった。これらの結果より1)ATII、C-キナーゼおよびA-キナーゼはATII受容体mRNAの発現を調節していること、2)受容体mRNAの増加は生理学的反応性と良く相関するが、受容体mRNAの減少は生理学的反応性と必ずしも相関しないことが示唆された。

Research Products

• [Publications] H.Aoki: "Sensitivity of G-protein involved in endothelin-1-induced Ca^<2+> influx to pertusis toxin in porcine endothelial cells in situ." Br J Pharmacol. 111. 989-996 (1994)
• [Publications] S.Kobayashi: "Cytosolic Ca^<2+> transients are not required for platelet-derived gorwth factor to induce cell cycle progression of vascular smooth" J Biol Chem. 269. 9011-9018 (1994)
• [Publications] S.Abe: "Effects of nicorandil on cytosolic calcium concentrations and on tension development in the rabbit femoral artery" J Pharmacol Exp Ther. 268. 762-771 (1994)
• [Publications] M.Ushio-Fukai: "The effects of novel vasodilator LP-805,on cytosolic Ca^<2+> concentrations and tension in rabbit isolated femoral arteries." Rrit J Pharmacol. 113. 1173-1182 (1994)
• [Publications] M.Kodama: "Myosin phosphorylation and Ca^<2+> sensitization in porcine coronary arterial smooth muscle stimulated with endothelin-1" Eur J Pharmacol. 288. 69-77 (1994)
• [Publications] M.Ushio-Fukai: "Endotheli-1 and endothelin-3 regulate differently vasoconstrictor responses of smooth muscle of the porcine coronary artery." Brit J Pharmacol. 114. 171-179 (1995)
• [Publications] H.Kanaide: "Pathophysiology of heart failure" Kluwer Academic Publisher,Boston(in press),
• [Publications] H.Kanaide: "Regulation of the contractile cycle in smooth muscle" Springer-Verlag,Tokyo(in press),