1992 Fiscal Year Annual Research Report

血圧調節機構におけるエンドセリン分解酵素の分子生物学的解析

Research Project

Project/Area Number	04454269
Research Institution	Kyoto Prefectural University of Medicine
Principal Investigator	山口希京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (40079752)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山村睦朗京都府立医科大学, 医学部, 助手 (10220443) 今西二郎京都府立医科大学, 医学部, 教授 (40112510)
Keywords	エンドセリン分解酵素 / エンドセリン / 無蛋白培養
Research Abstract	無蛋白培養可能なヒト膵がん培養細胞HPC-YOの培養上清からエンドセリン分解酵素(EDE)を発見した。限外濾過濃縮し、凍結乾燥した培養上清(約200L)をゲル濾過、陰イオン交換体、ヒドロキシルアパタイト等のカラムを用いてSDS-PAGE(2ME処理済み)で83Kdaの単一バンドを得た。N末端がブロックされていたため、精製品をリシルエンドペプチダーゼで限定分解し、部分アミノ酸配列を求めた結果、新規酵素であることが判明した。反復測定した結果6ヶ所の8〜12個のアミノ酸配列が明らかとなり、このうち親水性の高いペプチドを2種類合成することが出来た。これらをKLHと結合させ、特異性の高いポリクロナル抗体を作製し、精製EDEを用いて作製したポリクロナル抗体およびモノクロナル抗体を組み合せて、サンドウィッチELISAによる微量測定系を確立しつつある。培養上清を用いた予備実験では30ng/ml〜800ng/mlまで測定出来るようになった。血中濃度測定には末だ感度が低いために螢光プローブを用いた測定系を準備中である。一方、最も重要なcDNAクローニングも2種類の方法で実施している。すなわち、アミノ酸配列から作製したDNA合成プローブを用いたクローニングと、λgt11発現系に特異抗血清を作用させるクローニング法で、ライブラリーにはHPC-YO細胞のmRNAを用いている。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Hongo,M.,Itoi,M.,Yamaguchi,N. & Imanishi,J.: "Distribution of EGF receptors in rabbit corneal epithelial cells,Keratocytes and endothelial cells,and the changes induced by transforming growth factor β1." Exp.Eye Res.54. 9-16 (1992)
[Publications] Kita,M.,Ohmoto,Y.,Hirai,Y.,Yamaguchi,N. & Imanishi,J.: "Induction of cytokines in human peripheral blood mononuclear cells by mycoplasmas." Microbiol. Immunol.36. 507-516 (1992)
[Publications] Otsuji,E.,Yamguchi,T.,Yamaguchi,N.,Koyama,K.,Imanishi,J.& Takahashi,T.: "Expression of the cell surface antigen detected by the monoclonal antibody A7 in pancreatic carcinoma cell lines." Surgery Today. 22. 351-356 (1992)
[Publications] Shimada,Y.,Immamura,M.,Wagata,T.,Yamaguchi,N.and Tobe,T.: "Characterization of 21 newly established esophageal cancer cell lines." Cancer. 69. 277-284 (1992)
[Publications] Tong,L.J.,Yamaguchi,N.,Kita,M.& Imanishi,J.: "Enhancement of the growlh of human osteosarcoma cell line by human interferons." Cell Struct. & Funct.17. 257-261 (1992)
[Publications] Otsuji,E.,Yamaguchi,T.,Yamaguchi,N.,Imanishi,J. & Takahashi,T.: "Biodistribution of monoclonal antibody A7 and its F(ab^1)_2 fragment in athymic nude mice bearing human pancreatic carcinoma." J.Surg.Oncol.50. 173-178 (1992)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

血圧調節機構におけるエンドセリン分解酵素の分子生物学的解析

Principal Investigator

山口 希 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (40079752)

Research Products

[Publications] Hongo,M.,Itoi,M.,Yamaguchi,N. & Imanishi,J.: "Distribution of EGF receptors in rabbit corneal epithelial cells,Keratocytes and endothelial cells,and the changes induced by transforming growth factor β1." Exp.Eye Res.54. 9-16 (1992)

[Publications] Kita,M.,Ohmoto,Y.,Hirai,Y.,Yamaguchi,N. & Imanishi,J.: "Induction of cytokines in human peripheral blood mononuclear cells by mycoplasmas." Microbiol. Immunol.36. 507-516 (1992)

[Publications] Otsuji,E.,Yamguchi,T.,Yamaguchi,N.,Koyama,K.,Imanishi,J.& Takahashi,T.: "Expression of the cell surface antigen detected by the monoclonal antibody A7 in pancreatic carcinoma cell lines." Surgery Today. 22. 351-356 (1992)

[Publications] Shimada,Y.,Immamura,M.,Wagata,T.,Yamaguchi,N.and Tobe,T.: "Characterization of 21 newly established esophageal cancer cell lines." Cancer. 69. 277-284 (1992)

[Publications] Tong,L.J.,Yamaguchi,N.,Kita,M.& Imanishi,J.: "Enhancement of the growlh of human osteosarcoma cell line by human interferons." Cell Struct. & Funct.17. 257-261 (1992)

[Publications] Otsuji,E.,Yamaguchi,T.,Yamaguchi,N.,Imanishi,J. & Takahashi,T.: "Biodistribution of monoclonal antibody A7 and its F(ab^1)_2 fragment in athymic nude mice bearing human pancreatic carcinoma." J.Surg.Oncol.50. 173-178 (1992)

山口希京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (40079752)