1993 Fiscal Year Annual Research Report
血圧調節機構における新しいエンドセリン分解酵素の分子生物学的解析
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04454269
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| Research Institution | Koyto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
山口 希 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (40079752)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山村 睦朗 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (10220443)
今西 二郎 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (40112510)
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| Keywords | エンドセリン / エンドセリン分解酵素 / サンドイッチELISA |
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| Research Abstract |
1)エンドセリン分解酵素(endothelin degrading enzyme=EDE)の精製を行なった。ゲル濾過および陰イオン交換カラム、ヒドロキシルアパタイトカラムにより効率良く精製できた。分子量はSDS-PAGEで約83kdaで、等電点6.8のsingle peptideからなり、N-末端アミノ酸配列はblockされておりlysyl-endopeptidase digestionによる部分アミノ酸配列解析から4個の部分アミノ酸配列が明らかになり、データベース検索の結果、本酵素は新規の物質であることが判明した。
2)ポリクロナルおよびモノクロナル抗体を用いたサンドイッチELISAの確立によって一応ナノグラムの定量系ができた。培養上清を用いた系ではこの感度でも問題ないが、ヒトの血清では感度が低いことが判明した。
3)HPC-YO細胞のcDNAライブラリーから特異抗血清と明らかになった部分アミノ酸配列に対するDNAプライマーによるPCR法とで本酵素のcDNAクローニングに着手した。全長約2.8kbのcDNAにコードされた本酵素はDNAシークエンスの解析からも新規物質であることが確認された。クローニングされたcDNAの一部にはわずかながら不明の部分があり、これを明らかにするために今少しの時間の猶予を必要とする。
4)cDNAクローニングが完了していないことから、northern blot,in situ hybridizationによる本酵素の局在の分析が出来ていない。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Nozomi Yamaguchi et al: "A novel cytokine exhibiting megakaryocyte potentiating activity from a human paucreatic tumor cell line HPC-Y5" J,Biol.Chem.269. 805-808 (1994)
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[Publications] Miki Hongo et al: "Distribution of epidermal growth fuctor receptors in rabbit lens epithelial cells" Invest.Ophthalin.Visual Sci.32. 401-404 (1993)
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[Publications] J.Gu.et al.: "Purification and Characterization of UDP-N-acerylglucosarihe alpha-b-D-mannoside B_1-6N-acetyl glucosarinyltran sferase" J.Biochenistng. 113. 614-619 (1993)
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[Publications] Yutaka Shimada et al: "Character〓〓ation of 21newly estnblished esophageul cruce cell lines" Cancer. 69. 277-280 (1992)
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[Publications] Jong,L.T. et al: "Enhancement of the growth of human osteosarcoma cel〓〓 by human interferonig." Cell Structure & Function. 17. 257-26〓 (1992)
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[Publications] Miki Hongo et al: "Distribution of epidermal growth factor receptursin rabbit epithelial ulls keratoaytes a epimelial" Exp.Eye.Kes.54. 9-1〓 (1992)
