1992 Fiscal Year Annual Research Report
骨芽細胞のチロシンキナーゼをコードする遺伝子の機能と制御に関する研究
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04454462
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
松本 章 北海道大学, 歯学部, 教授 (40064365)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉村 善隆 北海道大学, 歯学部, 助手 (30230816)
鈴木 邦明 北海道大学, 歯学部, 助手 (40133748)
久田 洋 北海道大学, 歯学部, 講師 (20001018)
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| Keywords | 骨芽細胞様細胞株 / Total RNA / mRNA / ノーザンブロット分析 / チロシンキナーゼ / 遺伝子 |
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| Research Abstract |
平成4年度に行った研究によって得られた成果
1.細胞培養
(1)骨芽細胞様細胞株
(MC3T3E1細胞)の継代培養が、順調に行われるようになり、実験材料としての細胞供給は満足すべき状況となった。
2.ノーザンブロット分析
(1)MC3T3E1細胞からのTotal RNAの抽出技術は完成し、必要に応じて供給可能となり、ノーザンブロット分析の試料供給に不安は無くなった。
(2)アガロース電気泳動,ナイロンメンブレンへのトランスファー,遺伝子標識,ハイブリダイゼーション,オートラジオグラフィーなど、一連のノーザンブロット分析のための技術が完成した。
(3)Poly(A)^+RNAの抽出は現在、進行中である。
3.新知見
(1)MC3T3-E1細胞を10日間培養したのち、24時間無血清培養液に置き、引き続き、牛胎児血清で60分間処理し、c-fos遺伝子のメッセージを調べてみるとその発現が認められた。
(2)牛胎児血清の処理時間を0,5,10,15,30,60分間と細分して、そのメッセージの発現の程度を調べてみると30分で最も高いことが判明した。
今後の研究の展開に関する計画
1.mRNAの抽出について: いろいろな方法があるので一番、効果的な方法を用いてmRNA抽出法を確立する。
2.cDNA合成,cDNAライブラリー,cDNAクローニング等について: 平成5年度に完成する。
3.チロシンキナーゼmRNAの発現について: 市販のチロシンキナーゼDNAプローブを用いて調べる。
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[Publications] Akira Matsumoto: "Intracellular free calcium and phosphatidylinsitol-1,4,5-triphosphate in bone cells cultured in a low calcium environment." Jornal Bone and Mineral Metabolism. 10. 1-7 (1992)
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[Publications] Yoh Hisada: "Changes of protein kinase C activity in rat calvarial bone cells cultured in a low-calcium environment." Archives Oral Biology. 37. 695-698 (1992)
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[Publications] Yoh Hisada: "Functions of osteoblastic bone cells in low-calcium environments." The Japanese Journal of Pharmacology. 58(Suppl.1). 29- (1992)
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[Publications] Kuniaki suzuki: "Localization and characterization of acid and alkaline phosphases in the cultured bone cells." The Japanese Jouranal of Pharmacology. 58(Suppl.1). 357- (1992)
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[Publications] Akira Matsumoto: "Geneexpression in MC3T3-E1 cells cultured in a low-calcium environment." Journal of Dental Research.
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[Publications] Akira Matsumoto: "The effect of epidermal growth factor on a gene expression in the osteobalstic MC3T3-E1 cells cultured in a low-calcium environment." The Japanese Journal of Pharmacology.
