1993 Fiscal Year Annual Research Report

カリクレインキニン系の研究:遺伝的キニノゲン欠損ラットを用いた解析

Research Project

Project/Area Number	04454534
Research Institution	Kitasato University
Principal Investigator	大石幸子北里大学, 薬学部, 教授 (70050416)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	三田征治北里大学, 薬学部, 助手 (90200039) 宇都宮郁北里大学, 薬学部, 助手 (70168722) 八巻幸二北里大学, 薬学部, 助手 (70174597) 上野晃憲北里大学, 薬学部, 助教授 (00112657)
Keywords	カリクレイン・キニン系 / キニノゲン欠損ラット / 高分子キニノゲン / 低分子キニノゲン / ブラウン・ノルウェイ・ラット / カラゲニン胸膜炎 / ワンポイントミューテーション
Research Abstract	〔1〕キニノゲンの病態生理的役割:平成4年度までのキニノゲン欠損ラットを用いた研究によって、カラゲニンやカオリン胸膜炎の胸腔内滲出液貯溜にカリクレイン・キニン系の関与が推定された。そこで本年度はこの胸膜炎の炎症局所において、実際にキニノゲンからキニンが遊離されていることを証明するために、胸膜炎の炎症滲出液中のキニノゲンについてSDS-PAGE後イムノブロットを行った。まず滲出液をゲル濾過クロマトグラフィーにかけ、高分子キニノゲン(HK)分画と低分子キニノゲン(LK)分画をとり、HKのL鎖抗体(HK特異的)およびHK,LK両者を認識する抗体を用いて検討した。その結果滲出液中のHKは、還元パターンではL鎖H鎖に分れブラジキニンを遊離した形で存在するが、LKはインタクトであった。即ちカオリン、カラゲニン胸膜炎ではキニン遊離があるが、ザイモサン、ホルボルエステル胸膜炎ではキニン遊離は認められず、キニノゲン欠損ラットでの結果とよく符合した。〔2〕キニノゲンの生理的役割(尿中キニン):ラットの尿中ではキニン分解活性がヒト尿に比べて強く、またブラジキニンの抗体に反応する蛋白が多く含まれるため、正確なキニン量の測定報告がなかった。今回ラットを麻酔下で輸尿管より尿を採取し、その尿中のキニンを微量定量する方法、即ちSep-pak処理後酵素免疫測定法を用いる方法を確立した。これを用いて測定すると、キニノゲン欠損ラットの尿中キニンは正常に対して有意に低値であった。そこで欠損ラットの静脈内にHKまたはLKを持続注入し、尿中キニンの変化を調べたところ、LKの注入により尿中に有意なキニン量の増加が認められ、欠損ラットの腎臓はキニン遊離能力を有すること、また正常ラットの尿中キニンは主にLK由来であることがわかった。さらに、正常ラット尿中よりキニンを精製、アミノ酸配列を調べたところブラジキニンに一致した。

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

[Publications] I.Hayashi & S.Oh-ishi: "Plasma Kininogen deficiency:Associated defective secretion of kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biochemistry. 113. 531-537 (1993)
[Publications] Izumi Hayashi et al.: "A point mutation of alanine 163 to threonine is reponsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen by the liber of Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biological Chemistry. 268. 17219-17224 (1993)
[Publications] Hiroshi Fujie et al.: "The kinin release from high molecular weight-kininogen is responsible for inflammatory exudation in rats:Detection of kinin-free-kininogen in the exudate by immunoblot analysis" Life Sciences. 53. 1691-1701 (1993)
[Publications] I.Utsunomiya et al.: "Differential effects of indomethacin and dexamethasone on cytokine production in carrageenin-induced rat pleurisy" European Journal of Pharmacology. 252. 213-218 (1994)
[Publications] 大石幸子: "キニンとアンギオテンシン生体調節の分子機構" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)

1993 Fiscal Year Annual Research Report

カリクレインキニン系の研究:遺伝的キニノゲン欠損ラットを用いた解析

Principal Investigator

大石 幸子 北里大学, 薬学部, 教授 (70050416)

Research Products

[Publications] I.Hayashi & S.Oh-ishi: "Plasma Kininogen deficiency:Associated defective secretion of kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biochemistry. 113. 531-537 (1993)

[Publications] Izumi Hayashi et al.: "A point mutation of alanine 163 to threonine is reponsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen by the liber of Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biological Chemistry. 268. 17219-17224 (1993)

[Publications] Hiroshi Fujie et al.: "The kinin release from high molecular weight-kininogen is responsible for inflammatory exudation in rats:Detection of kinin-free-kininogen in the exudate by immunoblot analysis" Life Sciences. 53. 1691-1701 (1993)

[Publications] I.Utsunomiya et al.: "Differential effects of indomethacin and dexamethasone on cytokine production in carrageenin-induced rat pleurisy" European Journal of Pharmacology. 252. 213-218 (1994)

[Publications] 大石幸子: "キニンとアンギオテンシン 生体調節の分子機構" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)

大石幸子北里大学, 薬学部, 教授 (70050416)

[Publications] 大石幸子: "キニンとアンギオテンシン生体調節の分子機構" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)