1992 Fiscal Year Annual Research Report

生物発光検出酵素イムノアッセイによる生体成分の微量分析法の開発

Research Project

Project/Area Number	04454549
Research Institution	Showa University
Principal Investigator	前田昌子昭和大学, 薬学部, 助教授 (00053869)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	荒川秀俊昭和大学, 薬学部, 講師 (70129807) 辻章夫昭和大学, 薬学部, 教授 (80053784)
Keywords	イムノアッセイ / 生物発光検出法 / 酵素イムノアッセイ / ルシフェラーゼ / ルシフェリン / アセテートキナーゼ / 生物発光酵素イムノアッセイ / 微量分析法
Research Abstract	生体内には多種多様の生理活性物質が超微量からある程度の量にわたってバランスよく存在し、健康状態を保っている。臨床化学分析においては種々の生体内生理活性物質を測定することにより、診断の助としている。なかでも微量または超微量の成分に関しては免疫反応を利用した化学発光イムアッセイが最近開発され、繁用されている。著者らは化学発光法よりさらに高感度な生物発光検出法を用いれば、従来検出出来なかった微量成分が検出可能となり、さらに病態の解明に寄与出来る可能性がある。一方、遺伝子工学の進歩に伴い、種々の酵素が再構成されるようになり、生物発光酵素のホタルのルシフェラーゼも入手可能となった。このホタルのルシフェラーゼを標識する生物発光酵素イムノアッセイも考えられるが、本酵素は酵素自身を修飾に用いると酵素活性を著しく損なう。そこで著者らはホタルのルシフェラーゼの発光反応を検出に用いる超高感度な生体成分のアッセイ系を確立する目的で以下の検討を行なった。すなわちホタルのルシフェラーゼの発光反応に必要なATP産生酵素と組み合わせることにより、ATP産生酵素の活性測定に利用する方法である。ATP産生酵素としてアセテートキナーゼ(AK)を用いて以下の検討を行なった。 1.生物発光検出によるAK活性測定法の確立基質にアセチルリン酸およびADPを用い、生成するATPをルシフェリン・ルシフェラーゼで生物発光検出する方法を確立した。本法でAKは10^<-20>molまで測定可能となった。 2.AK標識酵素イムノアッセイ系の確立高分子生体成分として甲状腺刺激ホルモン(TSH)、IgG、hCGなどについてのイムノアッセイ法を確立した。これらについて1993年3月カナダで開催される国際会議で発表予定である。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] H.Arakawa,M.Maeda and A.Tsuji: "Bioluminescent Homogeneous Enzyme Binding Assay for Biotin using Luciferase as Label" Analytical Letters. 25. 1055-1063 (1992)
[Publications] Hidetoshi Arakawa,Masako Maeda and Akio Tsuji: "Chemiluminescent and Bioluminescent Assays for Polyadenylic Acid and Applications to DNA Probe Assay and Immunoassay" Anal.Sci.8. 481-485 (1992)
[Publications] Masako Maeda 他: "Chemiluminescence assay of β-D-galactosidase and its application to competitive immunoassay for 17-OHP and T_4" Anal Chim Acta. 266. 213-217 (1992)
[Publications] 前田昌子他: "ルシゲニンと銅(II)イオンを用いたグルコースオキシダーゼの化学発光測定法及びその酵素免疫測定法への応用" 分析化学. 41. 627-632 (1992)
[Publications] A.Tsuji,M.Maeda: "Recent advances of Chemiluminescent and bioluminescent enzyme immunoassay" Progress in clinical Biochemistry. 1. 207-211 (1992)
[Publications] 伊藤克敏、前田昌子他: "ヒト血中セクレチンの時間分解蛍光イムノアッセイ" 分析化学. 41. 627-632 (1992)
[Publications] (分担執筆)前田昌子: "化学発光イムノアッセイ(菅野・辻編)" ライフサイエンス社, 148 (1992)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

生物発光検出酵素イムノアッセイによる生体成分の微量分析法の開発

Principal Investigator

前田 昌子 昭和大学, 薬学部, 助教授 (00053869)

Research Products

[Publications] H.Arakawa,M.Maeda and A.Tsuji: "Bioluminescent Homogeneous Enzyme Binding Assay for Biotin using Luciferase as Label" Analytical Letters. 25. 1055-1063 (1992)

[Publications] Hidetoshi Arakawa,Masako Maeda and Akio Tsuji: "Chemiluminescent and Bioluminescent Assays for Polyadenylic Acid and Applications to DNA Probe Assay and Immunoassay" Anal.Sci.8. 481-485 (1992)

[Publications] Masako Maeda 他: "Chemiluminescence assay of β-D-galactosidase and its application to competitive immunoassay for 17-OHP and T_4" Anal Chim Acta. 266. 213-217 (1992)

[Publications] 前田 昌子 他: "ルシゲニンと銅(II)イオンを用いたグルコースオキシダーゼの化学発光測定法及びその酵素免疫測定法への応用" 分析化学. 41. 627-632 (1992)

[Publications] A.Tsuji,M.Maeda: "Recent advances of Chemiluminescent and bioluminescent enzyme immunoassay" Progress in clinical Biochemistry. 1. 207-211 (1992)

[Publications] 伊藤 克敏、前田 昌子 他: "ヒト血中セクレチンの時間分解蛍光イムノアッセイ" 分析化学. 41. 627-632 (1992)

[Publications] (分担執筆)前田 昌子: "化学発光イムノアッセイ(菅野・辻編)" ライフサイエンス社, 148 (1992)

前田昌子昭和大学, 薬学部, 助教授 (00053869)

[Publications] 前田昌子他: "ルシゲニンと銅(II)イオンを用いたグルコースオキシダーゼの化学発光測定法及びその酵素免疫測定法への応用" 分析化学. 41. 627-632 (1992)

[Publications] 伊藤克敏、前田昌子他: "ヒト血中セクレチンの時間分解蛍光イムノアッセイ" 分析化学. 41. 627-632 (1992)

[Publications] (分担執筆)前田昌子: "化学発光イムノアッセイ(菅野・辻編)" ライフサイエンス社, 148 (1992)